[发明专利]一种检测柯萨奇病毒A组6型核酸的可视化试剂盒及应用

说明书

本发明公开了一种检测柯萨奇病毒A组6型核酸的可视化试剂盒及应用。本发明提供的试剂盒包括如SEQ ID NO.1～3所示的引物和探针。本发明提供的方法能实现一步法柯萨奇病毒A组6型的快速准确检测；操作步骤较少，整个过程无需特殊的仪器设备，结果可通过一次性防污染核酸检测装置直接肉眼观察，具有操作简便快捷，防止污染，检测灵敏度高等优点，为柯萨奇病毒A组6型现场快速检测提供了一种有效方法。

技术领域

本发明属于医学检测领域，特别涉及一种检测柯萨奇病毒A组6型核酸的可视化试剂盒及应用。

背景技术

手足口病(Hand、foot、and mouth disease，HFMD)是一种主要由肠道病毒(Enterovirus，EV)所引起的常见儿童病毒传染性疾病。自HFMD在1957年首次报道以来，已在全球多个地区引起大规模爆发。在中国，HFMD亦是儿童最常见的传染病之一。我国于2008年将HFMD纳入丙类法定传染病，至2019年为止共报道了约1849万例HFMD，死亡人数约为3600例，且其发病人数连续10年居丙类传染病之首，HFMD已成为严重危害儿童健康的急性传染病之一。HFMD的主要临床表现为发热和/或手、足、口腔、臀部等部位皮疹，患者可在一周内痊愈，少数患者可在发病1-5天左右出现无菌性脑膜炎、脑干脑炎、急性弛缓性麻痹、心肌炎和神经源性肺水肿等严重并发症，甚至死亡。目前，已发现100多种EV血清型，其中柯萨奇病毒A组(Coxsackievirus A，CVA)6、10、16和肠道病毒71型(Enterovirus A71,EV-A71)被认为是造成HFMD的主要病原体。自2008年首次报道由CVA-6所引起的HFMD大爆发以来，CVA-6在HFMD中的检出率呈逐年上升趋势，甚至已取代CVA-16与EV-A71成为造成HFMD的主要流行株。目前，尚针对CVA-6感染的特异性抗病毒药物，且唯一的商业化EV-A71疫苗不能预防CVA-6感染。因此，早诊断早治疗是减少CVA-6感染所致重症及控制HMFD流行的重要手段。

目前对于CVA-6感染的实验室检测方法主要包括病毒分离培养、血清学和分子生物学等方法。病毒分离培养是诊断CVA-6感染的“金标准”，常用方法有细胞培养和乳鼠培养，通过采集患者粪便、肛拭子、咽拭子、脑脊液或疱疹液等制成悬液后接种于敏感细胞中进行培养，但此方法灵敏度低、培养时间长、对技术人员要求过高等缺点，限制其在临床上的应用，无法满足对疾病的早期诊断及病毒流行期大规模使用。常用的血清型检测方法有酶联免疫吸附试验、中和抗体检测、补体结合试验等，通过对单份血或急性期和恢复期双份血样本进行抗体检测从而做出诊断。该方法具有操作简便、对实验室和技术人员对要求不高等优点，适合在基层实验室开展，但因CVA-6血清型与其他血清型的EV之间由交叉反应使其临床运用价值有限，且机体产生抗体需要一定时间，不利于疾病的早期诊断。分子生物学方法是目前诊断CVA-6感染的最主要检测方法，可根据病毒衣壳蛋白VP1基因序列保守区域设计特异性引物及探针对CVA-6进行分型检测。相对于传统的培养法和血清学方法，分子生物学方法具有灵敏度高、特异性好和检测时间短等优点，目前已有少数的商业化荧光定量PCR(Fluorescence Quantitative PCR，FQ-PCR)已投入临床使用。但该方法的检测需要精密的温控设备和专业的实验室及相关的技术人员，这限制了其在现场快速检测中的运用，因此，仍需一种更为快速、灵敏、简便且不依赖于精密仪器新型检测方法，满足在不发达地区及疾病爆发现场对CVA-6快速检测的需求。