本发明提供了一种柯萨奇A16病毒抗原多肽具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。该抗原多肽采用生物信息学方法对多个柯萨奇A16病毒流行株进行基因学列比对设计合成的,可以针对多种亚型的柯萨奇A16病毒株。本发明还提供了一种柯萨奇A16病毒IgM抗体检测试剂盒,其采用酶标记抗原是柯萨奇A16病毒抗原多肽,可以针对多种亚型的柯萨奇A16病毒株,识别多种柯萨奇A16病毒感染的病毒血清。本发明的检测试剂盒重复性好,特异性强,灵敏度高,有效检测柯萨奇A16病毒感染的情况,在防控柯萨奇A16病毒感染方面起到积极有效的作用。