[发明专利]一种获得片段化DNA单链池的方法及其应用有效
| 申请号： | 202011253574.1 | 申请日： | 2020-11-11 |
| 公开（公告）号： | CN112410401B | 公开（公告）日： | 2023-04-07 |
| 发明（设计）人： | 齐浩;郜艳敏 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 刘猛 |
| 地址： | 300354 天津*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 获得 片段 dna 单链池 方法 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种获得片段化DNA单链池的方法，其特征在于，包括：
步骤1、将片段化DNA进行5’磷酸化；针对靶基因待测位点设计单条互补引物，所述单条互补引物5’端与靶基因结合位点位于所述待测位点的3’端一侧10-30bp；所述单条互补引物与靶基因结合区域不包含所述待测位点；
步骤2、以步骤1的5’磷酸化的片段化DNA为模板，利用所述单条互补引物进行PCR扩增；其中，PCR扩增体系中需加入ddNTPs和dNTPs；
步骤3、PCR扩增结束后加入lambda核酸外切酶降解掉模板，获得片段化DNA单链池。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述单条互补引物在PCR扩增体系中的浓度至少为0.2μM。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述PCR扩增体系中ddNTPs与dNTPs的比例为(0.02-50):1。
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