[发明专利]检测EGFR基因突变的核酸组合物及试剂盒和EGFR基因突变的检测方法

说明书

本发明涉及一种检测EGFR基因突变的核酸组合物及试剂盒和EGFR基因突变的检测方法。该检测EGFR基因突变的核酸组合物包括：序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.2所示的第一引物对和序列如SEQ ID No.3所示的第一探针；序列如SEQ ID No.4及SEQ ID No.5所示的第二引物对和序列如SEQ ID No.6所示的第二探针。上述核酸组合物对EGFR基因突变的特异性较高，能够检测EGFR基因突变，检测灵敏度较高。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，特别是涉及一种检测EGFR基因突变的核酸组合物及试剂盒和EGFR基因突变的检测方法。

背景技术

EGFR(Epidermal Growth Factor Receptor)即表皮生长因子受体，是原癌基因C-erbB-1(HER1)的表达产物，定位于细胞膜上，是一种对肿瘤细胞的繁殖、生长、修复和存活等起着重要作用的膜蛋白。

目前EGFR基因突变检测的主要方法有以下几种：1)Sanger测序法；直接测序法一直以来是基因突变检测的金标准，但是测序法存在很多缺点，比如耗时长，后续要对PCR产物进行处理，程序复杂，容易出现污染导致结果不准确。另外，测序法的灵敏度低，特别是在混合模板时检出率低，一般需要突变丰度达到20％以上才能准确检测。2)高分辨率熔解曲线(high-resolution melting，HRM)是通过饱和染料结合于PCR扩增产物监控其形成不同形态熔解曲线的基因分析新技术，其敏感性在5％左右。3)扩增阻滞突变系统(amplification refractory mutation system，ARMS)是根据引物3’端末位碱基必须与其模板DNA链互补才能进行有效的扩增。基于此，设计针对基因突变位点的引物序列，可以检测突变基因，该检测方法的灵敏度在1％左右。这些方法的检测灵敏度较低，不能满足实际需求。

发明内容

基于此，有必提供一种灵敏度较高的检测EGFR基因突变的核酸组合物。

此外，还有必要提供一种检测EGFR基因突变的试剂盒和EGFR基因突变的检测方法。

一种检测EGFR基因突变的核酸组合物，包括：

序列如SEQ ID No.1及SEQ ID No.2所示的第一引物对和序列如SEQ ID No.3所示的第一探针，所述第一引物对和所述第一探针用于检测EGFR基因的18号外显子的G719A突变、G719S突变及G719C突变中的至少一种；及

序列如SEQ ID No.4及SEQ ID No.5所示的第二引物对和序列如SEQ ID No.6所示的第二探针，所述第二引物对和所述第二探针用于检测EGFR基因的20号外显子的D770_N771insG突变；

其中，所述第一探针的两端分别连接有第一荧光报告基团和第一荧光淬灭基团，所述第二探针的两端分别连接有第二荧光报告基团和第二荧光淬灭基团，所述第一荧光报告基团与所述第二荧光报告基团不同。

上述核酸组合物中，第一引物对及第一探针对EGFR基因的18号外显子的G719A突变、G719S突变及G719C突变具有较高的特异性，能够检测EGFR基因的18号外显子的G719A突变、G719S突变及G719C突变，第二引物对和第二探针对EGFR基因的20号外显子的D770_N771insG突变具有较高的特异性，能够检测EGFR基因的20号外显子的D770_N771insG突变，检测灵敏度较高。经试验验证，上述核酸组合物能够检测0.1％的EGFR基因的18号外显子的G719A突变、G719S突变及G719C突变中的一种，且能够检测0.1％的20号外显子的D770_N771insG突变，灵敏度较高。

一种检测EGFR基因突变的核酸组合物，包括：