[发明专利]检测KRAS基因突变的核酸组合物及其试剂盒和检测方法

说明书

本发明涉及一种检测KRAS基因突变的核酸组合物及其试剂盒和检测方法。该核酸组合物包括：用于检测KRAS基因的G12S突变的第一正向引物，第一正向引物的序列如SEQ ID No.1所示，序列如SEQ ID No.8所示的通用反向引物，序列如SEQ ID No.9所示的第一通用探针。上述核酸组合物对KRAS基因突变的检测灵敏度较高。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，特别是涉及一种检测KRAS基因突变的核酸组合物及其试剂盒和检测方法。

背景技术

KRAS基因定位于12号染色体上，约35kb，是RAS基因家族的成员之一。研究发现导致KRAS基因处于激活状态的突变主要发生在第12和第13密码子上，最常见的热点突变为：G12C、G12S、G12R、G12V、G12D、G12A和G13D，这7种突变占KRAS所有突变的98.5％以上。

目前，KRAS基因突变检测的主要方法有以下几种：1)Sanger测序法；直接测序法一直以来是基因突变检测的金标准，但是测序法存在很多缺点，比如耗时长，后续要对PCR产物进行处理，程序复杂，容易出现污染导致结果不准确。另外，测序法的灵敏度低，特别是在混合模板时检出率低，一般需要突变丰度达到20％以上才能准确检测。2)高分辨率熔解曲线(high-resolution melting，HRM)是通过饱和燃料结合于PCR扩增产物监控其形成不同形态熔解曲线的基因分析新技术，其敏感性在5％左右。3)扩增阻滞突变系统(amplification refractory mutation system，ARMS)是根据引物3’端末位碱基必须与其模板DNA链互补才能进行有效的扩增。基于此，设计针对基因突变位点的引物序列，可以检测突变基因，该检测方法的灵敏度在1％左右。这些方法的检测灵敏度较低，不能满足实际需求。

发明内容

基于此，有必要提供一种灵敏度较高的检测KRAS基因突变的核酸组合物。

此外，还有必要提供一种检测KRAS基因突变的试剂盒和KRAS基因突变的检测方法。

一种检测KRAS基因突变的核酸组合物，包括：

用于检测KRAS基因的G12S突变的第一正向引物，所述第一正向引物的序列如SEQID No.1所示，序列如SEQ ID No.8所示的通用反向引物，序列如SEQ ID No.9所示的第一通用探针；

及/或，用于检测KRAS基因的G12R突变的第二正向引物，所述第二正向引物的序列如SEQ ID No.2所示，序列如SEQ ID No.8所示的通用反向引物，序列如SEQ ID No.9所示的第一通用探针；

及/或，用于检测KRAS基因的G12C突变的第三正向引物，所述第三正向引物的序列如SEQ ID No.3所示，序列如SEQ ID No.8所示的通用反向引物，序列如SEQ ID No.9所示的第一通用探针；

及/或，用于检测KRAS基因的G12D突变的第四正向引物，所述第四正向引物的序列如SEQ ID No.4所示，序列如SEQ ID No.8所示的通用反向引物，序列如SEQ ID No.10所示的第二通用探针；

及/或，用于检测KRAS基因的G12A突变的第五正向引物，所述第五正向引物的序列如SEQ ID No.5所示，序列如SEQ ID No.8所示的通用反向引物，序列如SEQ ID No.9所示的第一通用探针；

及/或，用于检测KRAS基因的G12V突变的第六正向引物，所述第六正向引物的序列如SEQ ID No.6所示，序列如SEQ ID No.8所示的通用反向引物，序列如SEQ ID No.9所示的第一通用探针；

及/或，用于检测KRAS基因的G13D突变的第七正向引物，所述第七正向引物的序列如SEQ ID No.7所示，序列如SEQ ID No.8所示的通用反向引物，序列如SEQ ID No.10所示的第二通用探针。