[发明专利]安乃近残留标识物半抗原和人工抗原及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及安乃近残留标识物半抗原和人工抗原及其制备方法与应用。所述安乃近残留标识物半抗原的结构如式I或式II所示，所述人工抗原为式I或式II所示的半抗原与载体蛋白偶联得到的抗原。利用所述安乃近残留标识物人工抗原免疫动物，可获得高特异性抗体。本发明制备了安乃近残留标识物的半抗原及人工抗原，可以满足国内外对安乃近残留标识物检测的需要。

技术领域

本发明涉及生物化工技术领域，具体涉及安乃近残留标识物半抗原和人工抗原及其制备方法与应用。

背景技术

安乃近(Dipyrone，简称DIP)是一种吡唑酮类非甾体类抗炎药物，具有解热、镇痛和抗炎作用，在畜牧养殖业中经常与抗生素联合使用，用于动物疾病的治疗。安乃近是一种典型的前体药物，其在体内被吸收后会迅速水解为4-甲氨基安替比林(MAA)，MAA再进一步代谢为4-甲酰氨基安替比林(4-FAA)、4-氨基安替比林(4-AA)和4-乙酰氨基安替比林(4-AAA)。四种代谢物中，MAA在体内存留时间最长，分布范围最广，因此通常作为安乃近兽药残留标识物。为加强对动物源性食品中安乃近的残留监管，保证动物产品质量安全，很多国家和地区都对安乃近残留标识物作出了最大残留限量规定：欧盟委员会规定MAA在牛奶中的最大残留限量为50μg/kg，在猪、牛、马的肌肉、脂肪、肝脏和肾脏组织中的最大残留限均为100μg/kg；我国农业部公告第235号文件规定，MAA在猪、牛、马的肌肉、脂肪、肝脏和肾脏组织中的最大残留限均为200μg/kg。

目前，兽药残留检测常用的方法有气相色谱、高效液相色谱以及气质联用等理化分析方法。这些方法虽然特异性强、灵敏度高，但是样品前处理复杂繁琐，检测时间长，成本也较高，推广使用受到限制。免疫分析方法是一种基于抗原与抗体特异性反应的定性定量分析方法，该方法特异性强、灵敏度高，操作简单，反应快速，适合现场大量样本的实时检测。

影响免疫分析方法的核心因素是抗体的特异性和亲和性，而抗体的性质又取决于半抗原的分子结构，因此半抗原的设计与合成就成为制备特异性抗体和建立小分子兽药残留快速检测技术的最基础和最关键的步骤。

发明内容

为解决现有技术中的技术缺陷，本发明的目的是提供一种安乃近残留标识物半抗原和人工抗原及其制备方法。

为实现本发明的目的，本发明第一方面提供两种安乃近残留标识物半抗原，其结构如下：

第二方面，本发明提供上述两种安乃近残留标识物半抗原的制备方法。

1、安乃近残留标识物如式Ⅰ所示时，制备方法包括如下步骤：

(1)将15mL己二酸单甲酯加入到20mL二氯亚砜中，50℃反应1h，旋干，得到化合物A。

(2)将化合物A和20g 4-氨基安替比林溶于10mL二氯甲烷中，加入30mL三乙胺，室温反应2h，水洗，旋干，得到化合物B。

(3)将化合物B溶于5mL甲醇中，滴加200μL 1mol/L的氢氧化锂水溶液，室温反应2h，1mol/L盐酸调节pH至3-4，二氯甲烷提取，旋干，得到化合物C，即为式Ⅰ所述安乃近残留标识物半抗原。

2、安乃近残留标识物如式II所示时，制备方法包括如下步骤：

(1)称取36g对苯二甲酸单甲酯加入到60mL二氯亚砜中，60℃反应2h，旋干，得到化合物D。

(2)将化合物D和40g 4-氨基安替比林溶于10mL二氯甲烷中，加入60mL三乙胺，室温反应2h，水洗，旋干，得到化合物E。

(3)将化合物E溶于10mL甲醇中，滴加400μL 1mol/L氢氧化锂水溶液，室温反应2h，1mol/L盐酸调节pH至3-4，析出白色固体，抽滤，滤饼水洗，旋干，得到化合物F，即为式Ⅱ所述安乃近残留标识物半抗原。