[发明专利]一种牡丹籽粕ACE抑制肽及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种牡丹籽粕ACE抑制肽及其制备方法。所述ACE抑制肽的氨基酸序列为Val‑Leu‑Ser‑Gly‑Phe（VLSGF），体外实验表明，该多肽具有良好的ACE抑制活性，IC₅₀为0.328 mg/mL。本发明所涉及的ACE抑制肽具有结构简单、安全、活性强等特点，易于进行生产，可用于制备高血压预防药物，或者作为功能食品添加剂供高血压患者食用。

技术领域

本发明涉及一种牡丹籽粕ACE抑制肽及其制备方法和应用，属于食品生物技术领域。

背景技术

高血压是一种心血管病综合征，也是危及人们心血管疾病的主要因素之一，其常伴随其他病症，如动脉粥样硬化、心肌梗死和中风等。高血压发病的原因一般是遗传和环境因素，当代在饮食习惯、作息规律、精神压力等因素的影响下，高血压病愈发普遍。

血管紧张素转换酶（ACE）是一类含锌的二肽羧基肽酶，它主要存在于肺和一些器官中，如脑、心、肝、肾、肠和胎盘中。此外，肺内皮细胞、吸收上皮细胞、神经上皮细胞和附睾细胞等几种细胞中也含有ACE。血管紧张素转换酶在参与高血压调节起到重要的作用，参与肾素-血管紧张素系统（RAS）和激肽释放酶-激肽系统（KKS）。ACE抑制肽的作用原理就是通过抑制或降低ACE酶活性达到降低血管紧张素II（Ang II）的生成和避免激肽、缓激肽的失活，起到调节血压的目的。常见的ACE 抑制剂药物有卡托普利、苯那普利、依那普利、培哚普利等，但是临床上显示长期服用降压药，会有咳嗽、血管性水肿、头痛等不良反应。因此，目前食源的降压肽研究得到重视，因其具有天然、安全性高、易吸收、无副作用的特点而备受关注。

牡丹籽经榨油后的籽粕大多丢弃或者作为动物饲料，其生物利用率低。牡丹籽蛋白含量为18%-35%，具有很高的营养价值。牡丹籽ACE抑制肽生产制备和保存方面的研究开发，能够达到牡丹籽粕蛋白的有效利用的目的，提高牡丹籽的附加价值，实现资源的综合利用。

发明内容

本发明的目的是提供一种牡丹籽粕ACE抑制肽及其制备方法和应用，提高牡丹籽的附加价值，实现资源的综合利用。

为实现上述目的，采用以下技术方案：

本发明提供一种ACE抑制肽，其氨基酸序列为Val-Leu-Ser-Gly-Phe，缩写为VLSGF，即由缬氨酸-亮氨酸-丝氨酸-甘氨酸-苯丙氨酸5个氨基酸残基构成。

进一步，所述ACE抑制肽可以来自于牡丹籽粕天然提取或人工氨基酸合成。

本发明提供一种所述ACE抑制肽的制备方法，包括如下步骤，

1）牡丹籽粕蛋白酶解产物的制备：牡丹籽粕经粉碎后，经石油醚脱脂干燥后过筛备用。采用碱提酸沉法得到牡丹籽粕蛋白，采用中性蛋白酶将其在以下酶解条件下酶解：底物浓度2%（w/v）、pH 7.50、酶添加量7200 U/g、温度43 ℃，酶解时间2 h，酶解后沸水浴10min灭活，冷却后调节pH至中性，4℃条件下10000 rpm离心20 min，取上清液冷冻干燥，即为牡丹籽粕蛋白质酶解产物。

2）牡丹籽粕蛋白的酶解产物利用Sephadex G-25凝胶色谱进行分离，以去离子水为洗脱液，流速0.3 mL/min，测量洗脱组分在214nm波长处的吸光值；收集具有最佳ACE抑制活性的峰，利用反相高效液相色谱RP-HPLC进一步分离；RP-HPLC的洗脱梯度为0-3 min，5%（V/V）乙腈（含0.1%三氟乙酸）；3-43 min，5%-40%（V/V）乙腈（含0.1%三氟乙酸）；43-53 min，40%（V/V）乙腈（含0.1%三氟乙酸）；流速为2.0 mL/min，检测波长214nm，收集洗脱时间为32-34 min的洗脱峰，真空冷冻干燥即得所述ACE抑制肽。

所述ACE抑制肽鉴定是通过LC-MS/MS对活性肽进行氨基酸序列鉴定。