[发明专利]愈创木烷型倍半萜类化合物及其制备和应用

说明书

本发明属于医药技术领域，涉及愈创木烷型倍半萜类化合物及其制备和应用。尤其涉及植物瑞香狼毒中的新愈创木烷型类化合物及其制备方法和这类化合物在神经细胞保护方面的应用。本发明所述的化合物通过乙醇提取、乙酸乙酯萃取、经硅胶柱色谱、HP‑20柱和ODS开放柱色谱、经硅胶柱色谱、制备高效液相分离得到。本发明的化合物及其含有该化合物的组合物具有神经保护作用，可以用于制备神经保护药物。

技术领域：

本发明属于医药技术领域，涉及愈创木烷型倍半萜类化合物及其制备和应用。尤其涉及植物瑞香狼毒中的新愈创木烷型类化合物及其制备方法和这类化合物在神经细胞保护方面的应用。

背景技术：

瑞香狼毒(Stellera chamaejasme L.)是瑞香科(Thymelaeaceae)狼毒属植物，主要分布于我国西北、东北、河北、内蒙古及尼泊尔等地。瑞香狼毒始载于《神农本草经》，为中药狼毒之正品，主要药用部位为根，传统中医认为瑞香狼毒性味辛、苦、平，归肺、脾、肝经，有毒，功能泻水逐饮，破积杀虫，主治水肿腹胀、痰食虫积、心腹疼痛、疥癣、癥瘕积聚等。瑞香狼毒的研究表明其含有多种化学成分，包含瑞香烷型二萜、倍半萜、黄酮、木脂素和香豆素等化合物。该植物被报道具有多种药理活性，如抗肿瘤、抗HIV、抗菌、杀虫、抗惊厥和免疫调节等作用。

氧化应激(oxidative stress,OS)：指机体内活性氧产生过多，导致氧化和抗氧化系统失衡，引起细胞或组织氧化损伤的一种病理状态。活性氧(reactive oxygen species,ROS)造成DNA、蛋白质和脂质等氧化损伤，破坏细胞结构和功能的完整性，引起细胞凋亡或坏死，与多种疾病发生相关。

国内外研究氧化应激的模型大体分为动物模型和体外细胞培养模型两种，其中应用最广泛的体外细胞培养模型是H₂O₂氧化损伤模型。H₂O₂作为活性氧类物质之一，不仅极易透过细胞膜，与细胞内铁离子反应生成高活性自由基，而且易于获得，性质稳定，已成为国内外研究各类细胞氧化损伤的重要工具。

神经退行性疾病(Neurodegenerative diseases)与氧化应激：神经退行性疾病是由于大脑和脊髓的神经元丧失而引起的一类不可逆转的神经系统疾病，特征表现为发作迟缓和选择性神经元的功能障碍。氧化应激在神经退行性疾病病理改变过程中具有重要的作用，ROS会造成神经元的死亡，促进疾病的发展。

发明内容：

本发明提供四种从瑞香科(Thymelaeaceae)狼毒属(Stellera Linn.)植物瑞香狼毒(Stellera chamaejasme L.)中提取分离得到的新愈创木烷型倍半萜类化合物或其药学上可接受的盐：

本发明的化合物的制备包括如下步骤：

(1)取干燥的瑞香狼毒根以乙醇回流提取，合并提取液浓缩得浸膏，浸膏采用乙酸乙酯萃取并将所得馏分经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇系统1:0-0:1v/v进行等度梯度洗脱，共收集到6个馏分(Fr.A-F)。

(2)馏分Fr.A经HP-20柱和ODS开放柱色谱，分别以甲醇-水系统10:90-90:10v/v进行梯度洗脱，得四个组分Fr.A1-A4。

(3)Fr.A3经硅胶柱色谱以石油醚-二氯甲烷系统50:1-1:1v/v在TLC分析的基础上得到四个亚组分Fr.A3a-Fr.A3d。

(4)在制备性反相高效液相色谱上使用甲醇-水(75:25-85:15v/v)的流动相来分离Fr.A3b得到了化合物1和化合物2；

在制备性反相高效液相色谱上使用乙腈-水(45:55-60:40v/v)的流动相来分离Fr.A3c得到了化合物3和化合物4。