[发明专利]一种大鲵抗氧化肽及其制备方法

说明书

本发明公开了一种大鲵抗氧化肽的氨基酸，序列为Val‑Pro‑Val‑Leu‑Pro，分子量为523.67Da，一种大鲵抗氧化肽的制备方法，属于食品生物技术领域，本发明包括如下步骤：(1)大鲵肌肉组织捣碎和高温高压蒸煮处理；(2)采用复合酶酶解大鲵肌肉，得到酶解产物；(3)微滤和超滤去除酶解液中未通过的大分子物质；(4)将滤液依次经过葡萄糖凝胶G‑50和G‑25进行二次分离纯化；(5)将步骤(4)中滤液经反相高效液相色谱层析RP‑HPLC分离纯化，冷冻干燥；(6)对上述纯化得到的组分鉴定其氨基酸序列。本发明的大鲵肌肉抗氧化肽具有较高的安全性，抗氧化活性强和易于吸收等优点。

技术领域

本发明属于食品生物技术领域，具体涉及一种大鲵抗氧化肽及其制备方法。

背景技术

中国大鲵(Andrias davidianus)属于脊索动物门，两栖纲，素有“活化石”之称，现属于我国二类野生保护动物。大鲵肌肉蛋白富含18种氨基酸，必需氨基酸占总氨基酸44.08％，是一种富含多种氨基酸的优质动物蛋白，被誉为“水中人参”。农业部规定养殖大鲵可作为食物资源进行合理开发，随着人工繁殖和育苗等关键技术的突破，大鲵养殖逐渐规模化，大鲵资源出现供大于求的问题。除直接食用或进行粗加工外，对大鲵资源进行深度开发相对较少，利用大鲵肌肉开发研究活性肽产品几乎没有，因此制约了大鲵产业的发展。

为了促进大鲵产业的发展，大鲵资源的深入开发研究和高值化利用已成为必须解决的问题。湖北世厚耀榜纪田农业发展有限公司在专利CN107074901中公布了从大鲵骨提取的小分子肽及其提取方法。该专利是将大鲵清洗粉碎，获得大鲵骨，蒸煮获得大鲵骨汤；对大鲵骨汤进行磁化，依次向其加入第一酶制剂，第二酶制剂和第三酶制剂，获得酶解液；向其加入蛋白分离液，用酒精激活离心后的上清液，冷却离心分离得到大鲵小分子肽(80-1000Da)。但上述技术方案并未评价小分子肽的活性功能和鉴定所得多肽的氨基酸序列。

因此，研究大鲵抗氧化肽及其制备方法具有较长远的科学理论指导和较高的经济价值意义。

发明内容

本发明的目的在于：

为解决现有技术中对大鲵资源进行深度开发相对较少，利用大鲵肌肉开发研究活性肽产品几乎没有，导致大鲵资源被浪费的问题，提供一种大鲵抗氧化肽及其制备方法。

本发明采用的技术方案如下：

一种大鲵抗氧化肽的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)大鲵肌肉组织捣碎和高温高压蒸煮处理；

(2)采用复合酶(中性蛋白酶和菠萝蛋白酶)酶解大鲵肌肉，得到酶解产物；

(3)微滤和超滤去除酶解液中未通过的大分子物质；

(4)将滤液依次经过葡萄糖凝胶G-50和G-25进行二次分离纯化；

(5)将(4)中滤液经反相高效液相色谱层析RP-HPLC分离纯化，冷冻干燥。

(6)将上述纯化得到的组分采用LC-MS/MS鉴定其氨基酸序列。

其中，步骤(1)具体为：以人工养殖大鲵肌肉为原料，用组织捣碎机搅打成肉糜后，经高温高压对肌肉蛋白组织进行熟化处理。熟化处理条件为121℃高温高压处理10min。

步骤(2)具体为：将熟化的物料冷却至50℃，加入复合蛋白酶对其进行酶解。

其中，所述的酶解条件为料液比1:4，酶解温度50℃，自然pH，酶添加量2000～4000U/g(以鲜肉质量计)，复合酶比例(中性蛋白酶:菠萝蛋白酶)1:1～1:4，酶解4～8h后，煮沸(100℃)灭酶15min后冷却至室温。5000～10000r/min离心10～15min，取上层清液，得酶解液。