[发明专利]一种检测Wx1分子标记及应用于甜糯玉米选育的方法

权利要求书

1.一种Wx1基因的检测引物在鲜食甜糯玉米自交系材料的分子标记辅助选育的用途，其特征在于所述引物的正向引物是5'-CAGGCTGGAAGAGCAGAAGG-3'，反向引物是5'-CACACGTACCAGCAGAACGAT-3'，所述用途包括以下步骤：

a)提取待测样本DNA；

b)用上述引物对进行PCR扩增；和

c)对PCR产物进行HRM分析扫描；

扩增产物的高分辨率熔解曲线与阳性对照玉米材料“京科糯2000”的熔解曲线一致，且与玉米材料“华旺甜7号”、“黑甜糯”的熔解曲线不同，即为甜糯双隐性玉米自交株系。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述的提取待测样品DNA的方法是取样品的幼嫩叶片，用液氮充分研磨，然后采用CTAB法进行提取。

3.根据权利要求1所述的用途，其中所述的PCR扩增的条件为94℃，3 min；94℃ 30S、55℃ 30 S、72℃ 10 S、72℃ 2 min，40个循环；95℃，2min。

4.一种鲜食甜糯玉米自交系材料的分子标记辅助选育方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：

a)以甜糯玉米材料为亲本，与其他甜质玉米品种杂交，提取F1代甜质子粒个体基因组DNA；

b)以引物对Wx1-HRM-1F、Wx1-HRM-1R进行PCR扩增和HRM分析扫描，留取其扩增产物的高分辨率熔解曲线与玉米材料“黑甜糯”的熔解曲线相同的植株，进行自交获得F2；

c)提取F2代个体基因组DNA，以引物对Wx1-HRM-1F、Wx1-HRM-1R再次进行PCR扩增和HRM分析扫描，与阳性对照玉米材料“京科糯2000”的熔解曲线一致，且与玉米材料“华旺甜7号”、“黑甜糯”的熔解曲线不同，即为甜糯双隐性玉米自交株系；

d)将步骤c选取的甜糯双隐性玉米自交株系进行田间筛选和自交繁殖，获得自交系；

其中所述引物Wx1-HRM-1F的序列为5’-CAGGCTGGAAGAGCAGAAGG-3’，所述Wx1-HRM-1R的序列为5’-CACACGTACCAGCAGAACGAT-3’。