[发明专利]一种用于检测乙脑病毒和盖塔病毒的核酸组及检测方法

说明书

本发明公开了一种用于检测乙脑病毒和盖塔病毒的核酸组及检测方法，核酸组包括用于检测乙脑病毒基因的第一引物对以及用于检测盖塔病毒的第二引物对；第一引物对包括：SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物；第二引物对包括：SEQ ID NO.4所示的上游引物和SEQ ID NO.5所示的下游引物。该核酸组可以用于检测样品中的乙脑病毒和盖塔病毒，具有较高的特异性和灵敏度。

技术领域

本发明涉及慢病毒检测技术领域，具体而言，涉及一种用于检测乙脑病毒和盖塔病毒的核酸组及检测方法。

背景技术

流行性乙型脑炎病毒，简称乙脑病毒(Japanese Encephalitis Virus，JEV)，属于黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus)成员，分为5种基因型(Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ)。最早于1935年在日本患者脑组织中分离到，因此又称日本脑炎病毒。我国除西部少数省、自治区外，均有报道从蚊子和猪体内分离到乙脑病毒。我国乙脑发病人数占世界总发病人数的80％，是发病率最高的国家，同时，乙脑对养猪业持续高产发展造成了重大威胁，各种年龄、品种、性别的猪均易感染此病，患病种猪可垂直传播传给仔猪。猪主要特征为高热、流产、死胎、仔猪死亡和公猪睾丸炎。猪是乙脑病毒最重要的中间宿主和最主要的传染源，对乙脑病毒有扩增作用，使乙脑病毒形成了“蚊－猪－蚊”的传播模式和“猪－蚊－人”的感染模式。

盖塔病毒(Getah Virus，GETV)属于披膜病毒科(Tongaviridae)甲病毒属(Alphavirus)成员。最早于1955年在马来西亚橡胶林中采集的白雪库蚊(雪背库蚊)(Culexgelidus)中分离到，命名为GETV，我国于1964年在海南省分离到第一株GETV(M1)，后从多个省的蚊子、库蠓和猪中分离到多株GETV，表明该病毒在我国分布较为广泛。已证实该病毒对猪、马等脊椎动物影响较大，能够引起马发热伴随发疹和浮肿，猪后肢水肿、淋巴结肿大及流产等症状，严重者还可出现神经症状，甚至衰竭死亡，人群中也存在该病毒感染。

乙脑病毒和盖塔病毒在我国已高度流行，具有分布广、发病迅速、传染性强、危害大等特点，尤其侵害了人类的健康，影响了猪、马养殖业的经济发展，而我国还未建立针对乙脑病毒和盖塔病毒的快速检测方法，我们有必要开发新型的、可快速执行的乙脑、盖塔病毒多重荧光PCR检测试剂盒，加强对这两种病毒引起的疾病的监测和快速确诊。鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测乙脑病毒和盖塔病毒的核酸组，该核酸组可以用于检测乙脑病毒和盖塔病毒，具有较高的特异性和灵敏度。

本发明的另一目的在于提供一种检测乙脑病毒和盖塔病毒的方法，该方法可以有效检测样品中的乙脑病毒和盖塔病毒，具有较高的特异性和灵敏度。

本发明是这样实现的：

聚合酶链式反应简称PCR(Polymerase Chain Reaction)(又称：多聚酶链式反应)PCR是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合反应，将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物延伸”三步反应的多次循环，使DNA片段在数量上呈指数增加，从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段。

一方面，本发明提供了一种用于检测乙脑病毒和盖塔病毒的核酸组，其包括用于检测乙脑病毒基因的第一引物对和用于检测盖塔病毒基因的第二引物对，所述第一引物对包括：SEQ ID NO.1所示的上游引物和SEQ ID NO.2所示的下游引物；所述第二引物对包括：SEQ ID NO.4所示的上游引物和SEQ ID NO.5所示的下游引物。

进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述核酸组还包括碱基序列如SEQ IDNO.3所示的荧光探针，以及碱基序列如SEQ ID NO.6所示的荧光探针。