本发明提供了一种牛结节性皮肤病病毒重组P32蛋白制备方法及其应用，属于基因工程技术和诊断试剂技术领域。本发明提供了牛结节性皮肤病病毒重组P32蛋白在制备检测牛结节性皮肤病病毒抗体试剂盒中的应用，编码所述牛结节性皮肤病病毒重组P32蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明在牛结节性皮肤病病毒截短P32蛋白的氨基酸序列基础上，进行密码子优化，用于牛结节性皮肤病病毒P32蛋白抗体的检测具有准确、特异、重复性好的优点，为牛临床感染情况的检测和鉴别诊断方法的建立及牛结节性皮肤病病毒P32蛋白抗体制备等奠定基础。
本发明涉及一种流行性出血病病毒及血清型鉴定RT‑PCR试剂盒，属于兽医传染病检测技术领域。本试剂盒包括：（1）检测流行性出血病病毒的特异性引物，核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑SEQ ID NO.2所示；（2）8对检测不同血清型流行性出血病病毒的引物对，核苷酸序列如SEQ ID NO.3‑SEQ ID NO.18所示；（3）反应试剂与阳性、阴性核酸对照。本发明具有灵敏度高、特异性好、快速简便、成本低廉的优势，一方面不仅可准确的对EHDV及其血清型进行鉴定，另一方面通过对扩增病毒的核酸序列测序，获取流行性出血病病毒的关键遗传特征，为分析病毒的进化特征提供数据。
本发明提供了一种曼氏杆菌属细菌特异性TaqMan实时荧光定量PCR的引物和探针、检测方法及应用，引物包括上游引物MA‑Pf和下游引物MA‑P，探针为MA‑Probe，序列分别如SEQ ID NO.1、NO.2和SEQ ID NO.3所示，探针的5'端标记有荧光报告基团FAM，探针的3'端标记有淬灭基团BHQ1。利用引物和探针建立的TaqMan实时荧光定量PCR能在1个反应管里同时检测曼氏杆菌属全部9个种细菌，且不与牛羊常见的细菌发生交叉反应。该方法具有特异性强、灵敏性高、重复性好、检测快速、操作简便、成本低廉等优点，可用于曼氏杆菌属细菌的快速鉴定和牛羊组织样品中曼氏杆菌属细菌的绝对定量检测，为牛羊曼氏杆菌属细菌感染的高通量快速检测提供了可靠方法。
