[发明专利]一种含脂肪酸侧链的胰岛素类似物的制备方法

权利要求书

1.一种含脂肪酸侧链的胰岛素类似物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)在含有胰岛素原类似物的溶液中加入胰酶进行酶切反应，通过取样检测酶切反应终产物的含量实时监控反应进度；

(2)通过加入结晶混合液以及调节pH值直接终止酶切反应，充分搅拌后，静置沉降结晶；充分沉降后，弃去上清至剩余溶液中所述酶切反应终产物的浓度≥50g/L；

(3)将步骤(2)所得产物与脂肪酸侧链进行酰化反应，得到含脂肪酸侧链的胰岛素类似物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的实时监控反应进度的方法具体为：

反应开始后每隔20～30min取样，在所得样品中加入终止液终止反应后送检，检测所述样品中酶切反应终产物的含量；所述终止液优选为磷酸溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述酶切反应终产物为切去B链30位苏氨酸的胰岛素类似物。

4.根据权利要求1～3任意一项所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述酶切反应终产物的纯度≥70％时，可进行步骤(2)。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的结晶混合液包含酚衍生物、有机酸、盐和锌化合物；

优选地，所述酚衍生物选自苯酚、间甲苯酚或间苯二酚；所述有机酸选自乙酸、甘氨酸或柠檬酸；所述盐选自氯化钠、柠檬酸钠或乙酸钠；所述锌化合物选自氯化锌、氧化锌、硫酸锌或乙酸锌。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述结晶混合液包含苯酚，柠檬酸，柠檬酸钠以及乙酸锌。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于，按步骤(1)所得溶液的体积L计，步骤(2)加入的酚衍生物的质量体积百分比为0.05％～0.5％，有机酸的质量体积百分比为0.1％～1.0％，盐的质量体积百分比为0.2％-0.7％以及锌化合物的质量体积百分比0.01％～0.1％。

8.根据权利要求1、5、6或7所述的方法，其特征在于，步骤(2)调节pH值至5.5～6.2。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述搅拌具体为在100～300rpm搅拌速度下，搅拌不少于10min。

10.根据权利要求1或9所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述静置沉降不少于10min。