[发明专利]一种利用二代测序高通量检测呼吸道病毒的方法与应用

权利要求书

1.一种利用二代测序高通量检测呼吸道病毒的方法，其特征在于，所述的检测方法为以下步骤：

(1)取样、分组、孔板编码；

(2)按组提取RNA，转移进入孔板，选用PP1引物进行富集目的片段；

(3)分组纯化，定量，混合样本，形成样本池，再次纯化浓缩；

(4)纯化后的样本池选用PP2引物进行扩增，再纯化，定量，混合所有样本池为一个终文库；

(5)对终文库进行测序，分析。

2.根据权利要求1所述的一种利用二代测序高通量检测呼吸道病毒的方法，其特征在于，步骤(1)样本选自鼻咽或口咽吸痰或冲洗液、鼻咽或口咽拭子、气管吸痰和痰液、支气管肺泡灌洗液中的一种，然后收集含有RNA保护液的试管中。

3.根据权利要求1或2所述的一种利用二代测序高通量检测呼吸道病毒的方法，其特征在于，分组中每组小于等于96个样本，建立孔板与样本相对应进行编码。

4.根据权利要求1所述的一种利用二代测序高通量检测呼吸道病毒的方法，其特征在于，步骤(2)利用一步法进行RNA逆转录及特定区域核酸的富集。

5.根据权利要求1或4所述的一种利用二代测序高通量检测呼吸道病毒的方法，其特征在于，PP1引物结构包括：将R1，BCT，FPT组合形成的上游引物，将R2，RPT组合形成的下游引物。

6.根据权利要求5所述的一种利用二代测序高通量检测呼吸道病毒的方法，其特征在于，FPT、RPT设计为所检测病毒核酸序列中的特异性片段。

7.根据权利要求1所述的一种利用二代测序高通量检测呼吸道病毒的方法，其特征在于，步骤(3)在完成富集纯化后，做浓度检测，若浓度大于1ng/μl，可在核酸片段检测仪器上检测片段大小，若片段大小符合预测大小，判定受试者有感染可能。

8.根据权利要求1所述的一种利用二代测序高通量检测呼吸道病毒的方法，其特征在于，步骤(4)中引物PP2结构包括：P5，R1P组合形成的上游引物，P7，BCL，R2P组合形成的下游引物。

9.根据权利要求1或8所述的一种利用二代测序高通量检测呼吸道病毒的方法，其特征在于，步骤(4)扩增的方法：将R1与PP2中的R1P组合，R2与PP2中的R2P组合，P5为二代测序时与测试仪芯片5端探针结合的序列，P7为二代测序时与测试仪芯片7端探针结合的序列。

10.一种根据权利要求1-9中任一项所述的利用二代测序高通量检测呼吸道病毒的方法在呼吸道病毒检测上的应用。