[发明专利]预测软枣猕猴桃果肉光响应着色效果的分子标记及其应用和试剂盒

说明书

本发明属于软枣猕猴桃人工培育及分子标记技术领域，具体涉及一种预测软枣猕猴桃果肉光响应着色效果的分子标记及其应用和试剂盒。本发明用于预测软枣猕猴桃果肉光响应着色效果的分子标记为全红型软枣猕猴桃中包含的转录因子基因AaMYB1，其基因ID为c122899‑g2，分子标记的上下游引物序列分别为5'‑CTATCCCTCACCGAGTTCGC‑3'和5'‑TCCGATCGACAGGTCCAGAT‑3'，利用本发明分子标记和试剂盒可准确预测猕猴桃果肉光响应着色效果，进而为筛选优质果品、提高产品品质和商业价值、进行种质创新和品种改良提供有力的技术手段。

技术领域

本发明属于软枣猕猴桃人工培育及分子标记技术领域，具体涉及一种预测软枣猕猴桃果肉光响应着色效果的分子标记及其应用和试剂盒。

背景技术

猕猴桃隶属猕猴桃科(Actinidiaceae)猕猴桃属(Actinidia Lindl.)，为多年生雌雄异株植物，共54个种，21个变种，绝大多数种原产于中国。猕猴桃以其独特的风味，富含维生素C、膳食纤维和多种微量营养元素，以及良好的清肠健胃等功效而受到人们的广泛关注，现已成为重要的水果种类之一。

当前种植业中猕猴桃的栽培品种主要来源于大果类型的中华猕猴桃原变种(Actinidia.chinensis Planch.var.chinensis)和美味猕猴桃变种(A.chinensisPlanch.var.deliciosa A.Chev.)以及小果类型的软枣猕猴桃(A.arguta(SieboldZucc.)Planch.ex Miq.)。猕猴桃果肉颜色主要分为三类：绿色、黄色和红色，其中全红型软枣猕猴桃作为新兴的高端水果产品，近年来发展迅速。

众所周知，果实色泽可以反映出果实的成熟度和风味，从而直接决定其商业价值，同时也是评价果实品质优劣的重要指标之一。研究表明，猕猴桃果实红色的显现是由于花色苷的合成和积累。花色苷属于类黄酮物质，广泛存在于植物体内，具有抗氧化、清除自由基、抗菌、消炎和抗病毒等功效。花色苷的合成受到内源基因(结构基因和调节基因)和外部因子的调控。结构基因通过编码花色苷合成过程中的相关酶类直接影响花色苷的合成，参与猕猴桃果实花色苷合成的结构基因AcF3H、AcDFR、AcCHS、AcLDOX、AaLDOX、AcF3GT1 和AcF3GGT1等均已克隆和鉴定。调节基因通过编码转录因子蛋白影响结构基因的表达从而间接调节花色苷的合成，MYBs、bHLHs和WD40s三大类转录因子通过形成MBW复合体调控花色苷的合成。如“红阳”猕猴桃果实AcMYB123 和AcbHLH42的共同表达能够调节其内果皮花色苷合成，而AcMYB75、 AcMYB110和AcMYBF110均能够调控猕猴桃果实花色苷的合成与积累。

除了内源基因之外，花色苷的合成还受到外界环境因子如光照、温度、水分等的影响，其中光照被认为是影响果实色泽形成的关键因素。光影响花色苷合成主要通过对相关基因的直接或间接调控来完成，例如，光照能够促进葡萄、苹果等果实中相关结构基因的表达从而影响花色苷的合成，而这些结构基因的表达受到MYBs转录因子的调控。如果能够对猕猴桃果实中与果肉花色苷合成相关的关键光响应调节基因进行有效的遗传分析，不仅有助于解析光照对猕猴桃红肉性状形成的影响机制，而且可以为预测猕猴桃果肉光响应着色效果、筛选优质果品、提高产品品质和商业价值、进行种质创新和品种改良提供有力的技术手段。

然而，由于猕猴桃种间杂交现象明显，染色体倍性复杂，采用常规的方法进行遗传学研究效率不高，DNA分子标记的发展为猕猴桃研究提供了有效的途径。DNA分子标记以个体间核苷酸序列变异为基础，是生物个体遗传变异的直接反映，利用其可以检测出生物个体之间核苷酸序列上的差异。目前，分子标记技术已应用于猕猴桃种质资源遗传多样性评价、遗传图谱构建、雌雄性别鉴定以及猕猴桃相关性状定位等领域。然而，与猕猴桃果肉光响应着色效果相关以用于预测红肉猕猴桃果肉色度的分子标记尚未见报道。

发明内容