[发明专利]制备在液体药物组合物中高度稳定的具有治疗活性的阿地白介素的方法

说明书

本发明涉及阿地白介素/SDS聚集体的液体药物组合物及其在治疗自身免疫性疾病、炎性病症和癌症中的用途。还描述了制备所述组合物的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求2018年6月13日提交的美国临时申请No：62/684,288(其以引用的方式整体并入本文)在35 U.S.C.§119(e)下的优先权的权益。

技术领域

本发明涉及包含在溶液中稳定的阿地白介素/SDS聚集体的新药物组合物及其药物用途。

背景技术

白介素2(IL-2)是调节T细胞和NK细胞的存活、增殖和分化的关键细胞因子(1)。这些生物学活性的发现导致IL-2在1994年被批准用于转移性肾癌的癌症免疫治疗的临床应用，1998年被批准用于转移性黑素瘤的临床应用。此后，IL-2成为推动从患者的肿瘤中提取的T淋巴细胞(肿瘤浸润淋巴细胞，TIL)的体外扩增的试剂，所述T淋巴细胞随后转移回患者以避免未来癌症的发展(2)。最近，IL-2也已用于扩增用抗原特异性T细胞受体转导的T细胞(3)或用于癌症治疗的用嵌合抗原受体(CAR)转导的T细胞(4)。由于发现IL-2在免疫应答中具有以下双重功能，最近出现了IL-2医学应用的新领域：a)众所周知的作为炎性应答的活化剂的活性，以及b)作为炎性应答的下调因子诱导调节性T细胞(CD4⁺Foxp3⁺Treg细胞)扩增(5)。可通过两种具有高或低的亲和力的IL-2受体的存在以及它们的特定细胞分布来解释此种看似矛盾的双重性(5)。此种IL-2的双重性导致了如下所述的相反的疗法：a)如在最初的癌症治疗中一样以高剂量使用IL-2来刺激免疫应答，以及b)如在自身免疫或炎性病症的治疗中一样以低剂量使用IL-2来抑制过度或异常的免疫应答。

当前的IL-2的多数临床应用(如果不是全部的话)是使用称为阿地白介素(des-ala-2ser125)(PROLEUKIN^TM)的天然IL-2的重组突变形式进行的。美国专利4,604,377教导了如何制备在无菌、稳定的冻干配制物中始终稳定(consistent)的重组IL-2(包括阿地白介素)的药物组合物，其中重组IL-2与提供体积的水溶性载体(例如甘露醇)和足以确保重组IL-2在水中的溶解度的量的十二烷基硫酸钠混合。所述配制物适合在水性注射剂中复水，所述注射剂用于肠胃外施用，在人患者中稳定和耐受良好。另一方面，最近在欧洲专利EP 1,688,146B中公开了制备PROLEUKIN^TM产品的过程的详细描述。

发明简述

本发明的一个方面是制备在用于对需要IL-2免疫疗法的患者进行肠胃外施用的液体药物组合物中高度稳定的阿地白介素的方法，所述方法一般包括以下步骤：a)发酵用经工程化以高表达阿地白介素基因的表达载体转染的大肠杆菌(E.coli)菌株，b)破碎细菌，c)收集含有阿地白介素聚集体的包涵体，d)使用SDS清洁剂溶解阿地白介素聚集体，e)用氧化性化合物(例如氯化铜)氧化，f)陶瓷羟基磷灰石色谱，g)用有机腈(例如乙腈)稀释，h)C4柱HPLC色谱，i)透析过滤(diafiltration)，以及j)过滤灭菌。