[发明专利]一种鉴别中药材何首乌及其混伪品的环介导等温扩增引物组及方法、试剂盒与应用

权利要求书

1.一种鉴别中药材何首乌及其混伪品的环介导等温扩增引物组，其特征是：所述引物组的序列如下：

正向内引物FIP：序列如SEQ ID NO：1所示；

反向内引物BIP：序列如SEQ ID NO：2所示；

正向外引物F3：序列如SEQ ID NO：3所示；

反向外引物B3：序列如SEQ ID NO：4所示。

2.权利要求1所述的环介导等温扩增引物组在制备鉴别何首乌及其混伪品试剂中的应用。

3.一种鉴别何首乌及其混伪品的检测试剂，其特征是：包括上述环介导等温扩增引物组。

4.如权利要求3所述的鉴别何首乌及其混伪品的检测试剂，其特征是：还包括dNTPs、Bst DNA聚合酶、10×ThermoPol buffer、KCl、MgSO₄、(NH₄)₂SO₄、甜菜碱、钙黄绿素、DNA模板。

5.如权利要求4所述的鉴别何首乌及其混伪品的检测试剂，其特征是：所述10×ThermoPol buffer包含20mM Tris-HCl(pH 8.8)、10mM KCl、2mM MgSO ₄、10mM(NH₄)₂SO₄、0.1％Triton X-100。

6.一种鉴别何首乌及其混伪品的检测方法，其特征是：采用权利要求1所述的引物组对何首乌及其混伪品的DNA进行扩增。

7.一种鉴别何首乌及其混伪品的环介导等温扩增检测试剂盒，其特征是：包含以下成分：

(1)权利要求1所述的SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4引物组；

(2)反应体系：dNTPs、Bst DNA聚合酶、10×ThermoPol buffer、KCl、MgSO₄、(NH₄)₂SO₄、甜菜碱、钙黄绿素、DNA模板及水；

(3)核酸检测染料；

(4)对照成分，其阳性对照为正品何首乌基原植物的DNA，阴性对照为不含目的基因的反应体系。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征是：所述反应体系为共25ul，含有1.6mM正向内引物FIP、1.6mM反向内引物BIP、0.2mM正向外引物F3、0.2mM反向外引物B3、10×ThermoPolbuffer 2.5μL、0.4mM dNTPs、8U Bst DNA聚合酶、1M甜菜碱、650mM钙黄绿素1μL、DNA模板(80～100ng/μL)1μL，无菌水补足至25μL。

9.一种鉴别何首乌及其混伪品的检验方法，其特征是：包括以下步骤：

以提取的待检测药材DNA为模板，加入权利要求1所述的SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4引物组，在权利要求7或8所述的环介导等温扩增试剂盒的反应体系中，65℃恒温水浴45min进行DNA分子的环介导等温扩增，扩增后，80℃水浴5min终止反应。