[发明专利]无血清培养基及其制备方法和间充质干细胞的培养方法

权利要求书

1.一种间充质干细胞的培养方法，其特征在于，采用无血清培养基培养间充质干细胞；

所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞；

所述无血清培养基由如下成分组成：

非必需氨基酸： 1vt%

谷氨酰胺： 2 mM

氢化可的松： 50 µg/L

地塞米松： 10 µg/L

聚乙烯醇： 2~10g/L

重组人胰岛素： 10 mg/L

重组人转铁蛋白： 5.5 mg/L

重组人表皮生长因子： 20 µg/L

重组人碱性成纤维细胞生长因子：20 µg/L

重组人Wnt-3a蛋白： 20 µg/L

重组人纤连蛋白： 50 µg/L

重组人层黏蛋白： 20 µg/L

L-谷胱甘肽： 4 mg/L

L-抗坏血酸： 50 mg/L

β-巯基乙醇： 2.5 mg/L

乙醇胺： 0.2 g/L

Pluronic F-68： 500 mg/L

Tween 80： 22 mg/L

胆固醇： 2.2 mg/L

腺嘌呤： 10 mg/L

亚硒酸钠： 0.00067 mg/L

基础培养基： 余量。

2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述基础培养基为DMEM/F12、高糖DMEM、a-MEM中的一种。

3.根据权利要求1或2所述的培养方法，其特征在于，所述无血清培养基的制备方法为：将非必需氨基酸、谷氨酰胺、氢化可的松、地塞米松、聚乙烯醇、重组人胰岛素、重组人转铁蛋白、重组人表皮生长因子、重组人碱性成纤维细胞生长因子、重组人Wnt-3a蛋白、重组人纤连蛋白、重组人层黏蛋白、L-谷胱甘肽、L-抗坏血酸、β-巯基乙醇、乙醇胺、Pluronic F-68、Tween 80、胆固醇、腺嘌呤、亚硒酸钠溶于基础培养基，过滤除菌。

4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，所述过滤除菌所用滤膜的孔径为0.22μm。

5.根据权利要求1或2所述的培养方法，其特征在于，所述培养的条件为5%CO₂、37℃，密度接种为（0.1~10）×10⁴个/mL。