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[发明专利]一种提升外泌体稳定性的方法及外泌体保存液-CN202311175966.4在审
发明人： 葛啸虎;陆路;韩春乐;王淼;王娜 -专利权人：天津外泌体科技有限公司
申请日： 2023-09-13 - 公布日： 2023-10-20 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明公开一种提升外泌体稳定性的方法及外泌体保存液，外泌体保存液由果胶和/或海藻酸钠与磷酸盐缓冲液混合得到，使用时，先将外泌体保存液加热制成胶体溶液，再加入新鲜外泌体，封存后可在常温条件下长期保存外泌体，保护液能够提高外泌体体系带电量，避免外泌体在粒径、浓度和活性上的变化，保护外泌体的完整性，稳定性，使得外泌体能够长期保持其生物活性，并保持其内含物的稳定性。
一种提升外泌体稳定性方法保存

[发明专利]牛奶外泌体装载烷基化美容肽及在化妆品中的应用-CN202311047717.7在审
发明人： 葛啸虎;董凤伟;陆路;王淼;柏玮;祁冬丽;黄德亿;韩春乐 -专利权人：天津外泌体科技有限公司
申请日： 2023-08-21 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： A61K8/64 文献下载
摘要：本发明提供了牛奶外泌体装载烷基化美容肽及在化妆品中的应用，本发明提供了一种装载有烷基化美容肽的牛奶外泌体制剂，包括烷基化美容肽和牛奶外泌体，所述烷基化美容肽的烷烃链插入到牛奶外泌体的磷脂双分子层膜中，所述烷基化美容肽在牛奶外泌体制剂中的包封率大于25%。所述烷基化美容肽装载到牛奶外泌体过程中pH满足以下条件：①所述牛奶外泌体制剂在电镜下能观察到完整清晰的外泌体，HPLC测得的纯度在55%以上，并且②所述烷基化美容肽的饱和浓度≥10μg/mL。装载烷基化美容肽后的牛奶外泌体应用在化妆品中，利用牛奶外泌体增强美容肽的透皮效果，其功效要超过牛奶外泌体与美容肽单独使用的功效加合。
牛奶外泌体装载烷基化美容化妆品中的应用

[发明专利]一种提高脐带间充质干细胞外泌体表达量的方法-CN202310651210.6有效
发明人： 葛啸虎;董凤伟;陆路;王淼;杜焕青 -专利权人：天津外泌体科技有限公司
申请日： 2023-06-05 - 公布日： 2023-09-08 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明公开一种提高脐带间充质干细胞外泌体表达量的方法，将人脐带间充质干细胞接种于可变溶氧条件的3D生物反应器中，溶氧条件为常氧转低氧培养，常氧条件氧分压控制为50%，低氧条件氧分压控制为15%。本发明的有益效果是：在3D生物反应器内常氧转低氧条件下培养的脐带间充质干细胞外泌体表达量较常氧、低氧及低氧转常氧条件明显提高；适于批量生产，易于推动脐带来源间充质干细胞外泌体生物产品的工业化生产。
一种提高脐带间充质干细胞体表方法

[发明专利]一种脂肪组织的单细胞悬液的制备方法-CN201911094195.X有效
发明人：陈东煌;陈海佳;葛啸虎;姜交华 -专利权人：广东国科细胞科技有限公司;广东省康琪莱精准医疗研究院
申请日： 2019-11-11 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： C12N5/077 文献下载
摘要：本发明涉及细胞技术领域，特别涉及一种脂肪组织的单细胞悬液的制备方法。本发明将中性蛋白酶、胶原蛋白酶I、胶原蛋白酶II、胶原蛋白酶Ⅳ、胰蛋白酶和DNAse六种酶组合，对脂肪组织进行酶解用于制备单细胞悬液。该方法步骤简单，获得的细胞数量多，细胞活率高，其中，活细胞总数为9.13×105～1.12×107cell/g脂肪组织，细胞活率为80～88％，细胞数量和细胞活率均明显优于对比方法。同时，实验表明，本发明制备的单细胞悬液适用于10xGenomics单细胞转录组测序，同时也可以用于组织细胞原代培养以及细胞分析。
一种脂肪组织单细胞制备方法

[发明专利]一步法叠氮化修饰细胞外囊泡的方法及修饰试剂-CN202210432738.X有效
发明人： 葛啸虎;王达;白云飞;王淼;董凤伟;陈巍;陆路;程国刚;肖更午;马德美 -专利权人：天津外泌体科技有限公司
申请日： 2022-04-24 - 公布日： 2023-08-04 - 主分类号： A61K49/00 文献下载
摘要：本发明公开一种一步法叠氮化修饰细胞外囊泡的方法及修饰试剂，在Lewis碱催化剂的催化条件下，叠氮化物将细胞外囊泡表面醇羟基取代为叠氮基，一步制备得到叠氮化修饰细胞外囊泡；修饰过程在不影响细胞外囊泡的形态学、膜结构及生物学功能。制备得到的叠氮化修饰的细胞外囊泡能够用于细胞外囊泡活体示踪，与炔化修饰的荧光探针在铜离子催化条件下进行点击化学偶联，完成对细胞外囊泡的荧光标记，荧光标记后的细胞外囊泡取得了良好的示踪效果，荧光标记率较高，稳定性高。
一步法氮化修饰细胞外囊泡方法试剂

[发明专利]外泌体冻干保护剂和外泌体冻干制剂的制备方法-CN202310273628.8有效
发明人： 葛啸虎;陆路;王淼;高梦雅 -专利权人：天津外泌体科技有限公司
申请日： 2023-03-21 - 公布日： 2023-07-14 - 主分类号： A01N1/02 文献下载
摘要：本发明提供了一种外泌体冻干保护剂和外泌体冻干制剂的制备方法，涉及冻干技术领域。该外泌体冻干保护剂以10~50 mmol/L的Tris缓冲液为缓冲体系；按照各物质在所述缓冲体系中的工作浓度计，还包括糖类物质1~5%w/v、醇类物质1~5%w/v、明胶水解物0.1~0.5%w/v和精氨酸50~500 mmol/L。该外泌体冻干保护剂和外泌体冻干制剂的制备方法缓解了现有技术中存在的冻干保护剂无法有效的维持外泌体冻干后生物活性的技术问题。
外泌体冻干保护制剂制备方法

[发明专利]一种基于二维液相评价外泌体纯度的方法-CN202211471282.4有效
发明人： 葛啸虎;韩春乐;陆路;何磊;王淼;王娜;高梦雅;孟晓竹;温智钧 -专利权人：天津外泌体科技有限公司
申请日： 2022-11-23 - 公布日： 2023-06-30 - 主分类号： G01N30/02 文献下载
摘要：本发明公开一种基于二维液相评价外泌体纯度的方法，通过二维液相色谱仪采用尺寸排阻法和离子交换色谱法结合的方法来评价外泌体纯度；样品首先进入液相色谱仪第一维的尺寸排阻色谱柱，采用第一维液相的流动相等度洗脱，使外泌体进行首次分析；再通过切换液相色谱仪的六通阀，对外泌体主峰部分进行中心切割进入第二维的离子色谱柱对其进行捕捉收集，通过第二维的流动相梯度洗脱进入检测器进行第二次分析。本纯度评价方法操作简单，自动化水平高，占用时间短，准确度高，适合大批样品同时检测，尤其适合未来外泌体大规模工业化生产的纯度评价工作，高效且过程可控。
一种基于二维评价外泌体纯度方法

[发明专利]促进体细胞重编程为诱导多能干细胞的培养基及方法-CN202310101650.4有效
发明人： 葛啸虎;杨一行;吴迪 -专利权人：淇嘉科技（天津）有限公司
申请日： 2023-02-13 - 公布日： 2023-05-19 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明提供了一种促进体细胞重编程为诱导多能干细胞的培养基及方法，该方法通过电转的导入形式将含有重编程因子的质粒导入体细胞后，接着在培养基中分阶段添加化学小分子TTNPB、2‑PCPA、RepSox和UNC0379以促进体细胞重编程。本发明方法能够使尿细胞重编程效率提升了大约7倍，重编程时长缩短了4‑5天，血细胞重编程效率提升了大约2.5倍。此外，该培养基同时兼容尿细胞与外周血细胞的特点，使其具备了更广泛的适用性。
促进体细胞编程诱导多能干细胞培养基方法

[发明专利]肺纤维化体外精准模拟方法-CN202310101661.2有效
发明人： 葛啸虎;吴迪 -专利权人：淇嘉科技（天津）有限公司
申请日： 2023-02-13 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供了一种肺纤维化体外精准模拟方法，随着TGFβ的持续诱导，本模型在体外重现了炎症反应的发生、促纤维化因子的异常累积、纤维化相关标志物的过表达等一系列纤维化进程中的重要分子事件，并在形态学与组织病理学上也呈现了纤维化的典型病理特征。
纤维化体外精准模拟方法

[发明专利]人仿生肺脏类器官构建方法-CN202310101655.7有效
发明人：吴迪;葛啸虎 -专利权人：淇嘉科技（天津）有限公司
申请日： 2023-02-13 - 公布日： 2023-05-12 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供了一种人仿生肺脏类器官构建方法，通过不同组合物与操作步骤实现了人多能干细胞向肺脏不同谱系类型的共分化与共培养。产生的类器官在谱系类型上兼具上皮细胞、内皮细胞、以及免疫细胞；结构上具备支气管样结构与肺泡样结构。适合作为新一代人源精细化肺脏类器官模型，为肺病的疾病模拟、机制解析、药物靶点发现、以及药效筛选提供精准可靠的研究与评价工具。
仿生肺脏器官构建方法

[发明专利]抗肺纤维化药效筛选流程-CN202310101646.8有效
发明人： 葛啸虎;吴迪 -专利权人：淇嘉科技（天津）有限公司
申请日： 2023-02-13 - 公布日： 2023-05-02 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供了一种抗肺纤维化药效筛选流程，通过如下操作实现抗纤维化药效筛选：（1）由多能干细胞诱导产生多谱系肺类器官；（2）对（1）中肺类器官进行质量检定，包括形态表征与谱系类型检定；（3）对（2）中过检的类器官进行纤维化造模与药物处理；（4）对（3）中的纤维化模型质量检定，包括纤维化血清标志物检定；（5）对（4）中过检的模型进行药效测试，包括病理染色分析与纤维化相关标志物免疫染色分析以及肺纤维化血清标志物分析。该流程从不同角度进行抗纤维化药效测试，可为后续靶点验证、特异性验证等环节提供更丰富准确的信息支撑；有望成为新一代抗纤维化新药评价方法，用以缩短新药开发周期，提高成功率。
纤维化药效筛选流程

[发明专利]利用博来霉素体外构建肺纤维化疾病模型的方法-CN202310101642.X有效
发明人：吴迪;葛啸虎 -专利权人：淇嘉科技（天津）有限公司
申请日： 2023-02-13 - 公布日： 2023-05-02 - 主分类号： C12N5/07 文献下载
摘要：本发明提供了一种利用博来霉素体外构建肺纤维化疾病模型的方法，该模型拥有致密而复杂的肺脏结构，可耐受体内通用诱导剂博来霉素的长期诱导，极大延长了纤维化模拟与药效分析的时间窗。除含有肺的主要上皮细胞类型外，模型中的巨噬细胞具备功能性，可忠实地还原肺驻留巨噬细胞通过分泌TGF‑β1而促进胶原沉积的病理机制。
利用霉素体外构建纤维化疾病模型方法

[发明专利]多谱系肝类器官模型及基于该模型的药物肝毒评价方法-CN202211314796.9有效
发明人：吴迪;葛啸虎;王莉莉;李慧芳;徐迎;罗晓琴;曹宁 -专利权人：天津外泌体科技有限公司
申请日： 2022-10-26 - 公布日： 2023-02-03 - 主分类号： C12N5/071 文献下载
摘要：本发明提供了一种多谱系肝类器官模型及基于该模型的药物肝毒评价方法，该模型使用添加有GDF8、NOG、FGF4、前期分化组合物、后期分化组合物和EGM‑2的培养基对hPSC培养，最终获得多谱系肝类器官模型；该评价方法包括质量检定步骤以及药物性肝毒评价步骤。基于该类器官的肝毒评价方法比原代肝细胞灵敏度更高，可有效检出AST、ALT等肝损指标，准确区分结构类似物的肝脏毒性，识别譬如胆汁淤积毒性、线粒体毒性等传统体内/外模型难以辨认的特异质肝毒。应用此新型药物肝毒评价方法，将填补当下2D/3D细胞模型与动物模型之间的沟壑，有助于降低药物的未知肝毒风险，提高药物开发成功率。
谱系器官模型基于药物评价方法

[发明专利]一种修饰细胞外囊泡的试剂及制备方法-CN202210164997.9有效
发明人： 葛啸虎;王达;董凤伟;陆路;马德美;王淼;程国钢;白云飞;韩春乐;陈宁 -专利权人：天九再生医学（天津）科技有限公司
申请日： 2022-02-23 - 公布日： 2023-01-31 - 主分类号： A61K47/54 文献下载
摘要：本发明公开一种修饰细胞外囊泡的试剂及制备方法，将叠氮化修饰的修饰物与经过羧基活化的二苯环辛炔酸进行点击化学偶联，形成同时具备修饰物功能基团与活性酯基团的修饰细胞外囊泡的试剂。本发明有益效果是：不改变细胞外囊泡的形态学及结构组成，也不影响细胞外囊泡的生物学功能，能够稳定、高效且可控地修饰细胞外囊泡；例如，修饰物为荧光探针时，能够高效可控地对细胞外囊泡进行修饰，取得了良好的细胞外囊泡的可视化效果，能够为开发细胞外囊泡活体示踪方法及细胞外囊泡示踪药物提供新策略。
一种修饰细胞外囊泡试剂制备方法

[发明专利]一种增强间充质干细胞免疫调节能力的方法-CN202210531798.7有效
发明人： 葛啸虎;曹宁;徐萌;郑阳阳;王艳红;吴康;姜岩;刘可可;乔倩 -专利权人：天九再生医学（天津）科技有限公司
申请日： 2022-05-17 - 公布日： 2022-12-06 - 主分类号： C12N5/0775 文献下载
摘要：本发明提供的一种增强间充质干细胞免疫调节能力的方法通过添加抗坏血酸衍生物与白细胞介素因子、肿瘤坏死因子联合顺次使用以持续、稳定的提高间充质干细胞抗炎功能，而不影响细胞增殖、免疫原性，以及后续临床应用的安全性。
一种增强间充质干细胞免疫调节能力方法

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