[发明专利]一种阿胶多肽及其制备方法

说明书

本发明公开了一种阿胶多肽及其制备方法，属于分析化学技术领域。所述阿胶多肽的氨基酸序列为YQCLKGTGK、CTTPPPSSGPKYQCLK、MDNPDTFYSLKYQIK、FAAFIDK、ANKGFLEEVR中的一种。所属阿胶多肽的制备方法为阿胶研磨成粉炖化制得阿胶提取液，然后经胰蛋白酶酶解、固相萃取柱分离纯化，液相色谱‑质谱联用检测分析合成获得。本发明的阿胶多肽有羟基自由基清除活性和抗凝血活性，并且阿胶多肽呈浓度‑功效相关性。

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种阿胶多肽及其制备方法。

技术背景：

阿胶是我国传统名贵中药，与人参、鹿茸并称“中药三宝”，迄今已有3000年的药用历史，同时也被我国列为具有免疫调节及改善营养性贫血功能的药食同源产品，长期以来深受人们喜爱。

阿胶以马科动物驴的皮去毛熬制成而成，我国诸版药典均以驴皮制胶为“阿胶”。根据《中华人民共和国药典》（2015版），阿胶的功能有补血滋阴、润燥、止血。

近年来，研究人员应用了多种技术手段以期揭示阿胶的功效作用。然而，对阿胶化学成分的研究并未发现阿胶中含有明确具有药理作用的物质，现有的文献针对的都是阿胶本身进行的功效研究，也因此对于阿胶功效出现争议。阿胶的基本成分是驴皮所含原胶原的降解物，蛋白类含量约60% ~ 80%左，蛋白经酶解后生成的肽涉及生物体内多种细胞功能的生物活性，是机体完成各种复杂的生理活性必不可少的参与者，涉及激素、神经、细胞生长和生殖各领域，细胞的功能活动受肽的调节。阿胶作为药品或食品服用后，进入人体经消化过程同样是酶解成肽后被再人体吸收，因此，以肽为目标物对阿胶功效进行评价是科学可行的。基于此考虑，本发明提出了一种通过分离遴选阿胶中的肽段，以考察肽段的活性来验证阿胶功效的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种阿胶多肽及其制备方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种阿胶多肽，其氨基酸序列为：YQCLKGTGK、CTTPPPSSGPKYQCLK、MDNPDTFYSLKYQIK、FAAFIDK、ANKGFLEEVR中的一种。

上述一种阿胶多肽的制备方法，包括以下步骤：

（1）阿胶提取液的制备：阿胶研磨成粉，加去离子，在一定温度下炖化，冷却后冷藏过夜，离心取炖化液上清，制得阿胶提取液；

（2）阿胶多肽的制备：步骤（1）的阿胶提取液经胰蛋白酶酶解，取酶解液上清，经C18固相萃取柱分离纯化，洗脱液干燥后再溶解过0.45 µm滤膜，得阿胶多肽；

（3）步骤（2）制备所得阿胶多肽以液相色谱-质谱联用进行检测；

（4）步骤（3）的检测结果进行数据分析,合成阿胶多肽氨基酸序列。

上述步骤（1）阿胶提取液的制备，具体为：阿胶研细成阿胶粉，加入20倍重量的去离子水，80℃炖化30 min，冷却后冷藏过夜，将炖化液于4℃以18000rpm离心5min，取上清液过滤后，得阿胶提取液。

上述步骤（2）阿胶多肽的制备，具体为：步骤（1）制备的阿胶提取液以10 % NaOH溶液调节pH =7.5，40℃水浴中以浓度为3×10⁴ U/g~6×10⁴ U/g胰蛋白酶酶解，酶解过程中每隔1 h调节一次pH，使pH值始终保持在7.5；酶解4 h后灭酶活，冷却后于4℃以18000rpm离心5min，取上清液3mL过C18固相萃取柱分离纯化（预先以3 mL甲醇、3 mL去离子水活化），以3×3 mL甲醇洗脱，收集洗脱液，45℃氮吹干，以1 mL 1 %甲酸溶液溶解，过0.45 µm滤膜，得阿胶多肽。