[发明专利]利用荧光定量PCR检测MEF2D基因重排的引物和探针及试剂盒

说明书

本发明公开了一种利用荧光定量PCR检测MEF2D基因重排的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：RNA提取试剂、逆转录试剂、检测体系PCR反应液、阳性对照品和阴性对照品，能够对人类B‑ALL中MEF2D基因重排进行检测，可有效的节约检测时间，提高检测精度，有助于临床上B‑ALL患者体内MEF2D基因重排的检测，对于分型诊断、调整治疗方案、评价治疗效果、预测预后、预防临床复发都具有重要意义。

技术领域

本发明属于生命科学和生物技术领域，涉及一种临床检验用途的基因检测方法，采用探针实时荧光PCR技术，能够对人类B-ALL中MEF2D基因重排进行检测，可有效的节约检测时间，提高检测精度。

背景技术

白血病是一组高度异质性造血系统恶性肿瘤，其病因和发病机制至今未明。目前发现细胞遗传学改变在白血病发生中起重要作用，常见细胞遗传学异常如染色体数目改变、染色体易位和原癌基因异常表达等。它们通过改变造血细胞的自我更新、增殖和分化机制导致造血干细胞或定向祖细胞向白血病细胞转化。随着免疫学、分子生物学、分子细胞遗传学的飞速发展，人们对白血病发生的分子机制有了更深入的认识，发现了一些特异的、与疾病诊断和预后密切相关的基因改变，如伴有t(15；17)(q22；q21)的急性早幼粒细胞白血病、伴有t(8；21)(q22；q22)和inv(16)(p13；q22)或t(16；16)(p13；q22)的急性髓系白血病等。除了常见的染色体易位类型外，还存在一些染色体异常发生率较低，但对白血病的分型诊断及预后均有重要价值。

肌细胞增强因子2D(Myocyte enhancer factor,MEF2D)基因位于1q22，是近年来在ALL中鉴定出的一种基因重排，主要有5种基因融合：BCL9(1q21)、HNRNPUL1(19q13.2)、DAZAP1(19p13.3)、CSF1R(5q32)及SS18(18q11.2)。MEF2D相关融合基因主要发生在儿童和青少年B-ALL，发生率约2.4％。MEF2D是机体内重要的转录因子，可参与调控肌肉及神经细胞的分化及发展。研究发现MEF2D基因重排可增强其转录活性和淋巴转换，因此可能导致一种高风险白血病亚型。

虽然MEF2D基因重排的发生率远小于BCL-ABL等常见类型，发生率仅在2％左右，但是携带不同类型基因重排的白血病发病机制不同，细胞遗传学和分子生物学的诊断标准不同，其治疗方案及预后亦有不同，所以检测MEF2D基因重排在白血病特别是B-ALL的分型诊断和治疗方案及预后评估中起到重要作用。

MEF2D基因重排检测的常用技术有荧光原位杂交技术(FISH)、RQ-PCR等方法。FISH检测结果较为直观，但是试验过程繁琐，涉及试剂种类繁多，费时费力，且结果需经验丰富的专业人士来判读，结果判读存在较大的主观性。RQ-PCR采用Taqman探针荧光定量技术，综合生物学、酶学和荧光化学于一体，从扩增到结果分析均在PCR反应管封闭状态下进行，解决了PCR产物污染而导致假阳性的问题，同时也提高了敏感度，其结果用拷贝数表示，实现了对PCR产物的准确定量，易于统一标准，与定性PCR技术相比，具有特异度好，灵敏度高，线性关系好，操作简单，自动化程度高、防污染，有较大的线性范围等优点。能够满足MEF2D基因重排的检测，被认为是目前首选检测方法，用于评价治疗效果、预测预后。实时荧光定量PCR中常见的方法有SYBR GreenI染料法，双探针杂交法以及Taqman技术等。其中SYBRGreenI由于是非饱和染料，特异性不如双探针杂交法以及Taqman法，必须通过观察溶解曲线来判断其特异性；而双探针杂交法成本又较为昂贵。因此本研究采用实时荧光PCR技术结合Taqman探针法应用于MEF2D的基因重排检测。

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明公开了一种利用荧光定量PCR检测MEF2D基因重排的引物和探针及试剂盒，能够对人类B-ALL中MEF2D基因重排进行检测，可有效的节约检测时间，提高检测精度。

利用荧光定量PCR检测MEF2D基因重排的引物和探针，其特征在于，所述引物和探针的碱基序列如下：