[发明专利]一种聚酮化合物、制备方法、菌株及应用

说明书

本发明公开了一种聚酮化合物、制备方法、菌株及应用，将青霉菌接种至发酵培养基，在28℃条件下发酵培养，取发酵液进行分离纯化，获得所述聚酮化合物；本发明所涉及的聚酮化合物对三阴乳腺癌细胞MDA‑MB‑231的增殖具有较好的抑制作用。

(一)技术领域

本发明涉及一种新的聚酮化合物及其制备方法和其在作用于三阴乳腺癌细胞活性方面的应用。

(二)背景技术

三阴乳腺癌指的是雌激素受体、孕激素受体和人类表皮生长因子受体-2均为阴性或低表达的乳腺癌。在中国，三阴乳腺癌约占所有乳腺癌患者的20％。与普通乳腺癌相比，三阴乳腺癌好发于绝经前的年轻女性，肿瘤分级更高，确诊时分期更晚，肝、肺和脑转移率极高，死亡风险较高。此外，由于缺乏相应的受体，目前临床上尚无针对性的三阴乳腺癌治疗方案，而对于普通乳腺癌治疗临床效果较好的内分泌治疗和分子靶向治疗方案，对于其均无效。由于其高发病率及低治愈率，三阴乳腺癌已成为女性健康的杀手之一。因此，三阴乳腺癌治疗药物的研发对于攻克该疾病和造福广大女性具有重要的现实意义。

真菌能够产生结构新颖多样的活性次级代谢产物，是药物先导化合物的重要来源之一。以青霉素、环孢菌素A和洛伐他丁等为代表的真菌来源药物为人类的健康作出了重大贡献。然而，真菌来源的抗三阴乳腺癌天然产物研究尚处于起步阶段，广泛深入地开展真菌中抗三阴乳腺癌作用的次级代谢产物研究，有望获得具有疗效明确的新型三阴乳腺癌治疗药物先导，助力该疾病临床治疗药物的研发。

(三)发明内容

本发明目的是针对目前临床尚无三阴乳腺癌治疗药物这一问题，提供一种具有强效抗三阴乳腺癌细胞活性的化合物及其制备与应用。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种式(1)所示的聚酮化合物，该化合物以青霉菌为发酵菌，按常规方法培养发酵、提取分离得到具有三环[5.3.1.0^3,8]十一烷骨架的聚酮化合物，

本发明还提供一种所述聚酮化合物的制备方法，所述方法为：(1)发酵：将青霉菌(Penicillium sp.)ZJUT-HS-11接种至发酵培养基后，在25～28℃、150～180rpm条件下发酵培养14天，获得发酵液；所述青霉菌ZJUT-HS-11，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2019年4月15日，保藏编号为CCTCC NO.M 2019259，保藏地址为中国，武汉，武汉大学；所述发酵培养基质量终浓度组成为：碳源10-30g/L、氮源10-25g/L、无机盐0.5-1g/L，真菌化学表观遗传调控剂0.01-0.1g/L，溶剂为水，pH自然，所述真菌化学表观遗传调控剂为辛二酰苯胺异羟肟酸、辛二酰二异羟肟酸、丁酸钠、烟酰胺或丙戊酸中的一种或任几种，优选辛二酰苯胺异羟肟酸，所述真菌化学表观遗传调控剂以40mg/ml二甲基亚砜溶液的形式加入；(2)提纯：将发酵液过滤，取菌丝体干燥后用丙酮室温浸泡提取(优选三次，每次1.5L，每次提取1小时，合并提取液)，提取液减压浓缩至无液体流出，获得丙酮提取物；将丙酮提取物悬浮于水中，用乙酸乙酯萃取(优选3次，每次500mL，合并有机层)，取有机层减压浓缩至无液体流出，得乙酸乙酯胞内萃取物；将乙酸乙酯胞内萃取物用石油醚-丙酮5:1混合溶剂溶解后进行硅胶柱层析，用体积比1-5:1的石油醚丙酮溶液为洗脱液(优选依次用体积比5:1的石油醚-丙酮溶液、体积比4:1的石油醚-丙酮溶液、体积比3:1的石油醚-丙酮溶液、体积比2:1的石油醚-丙酮溶液、体积比1:1的石油醚-丙酮溶液洗脱，每个洗脱液洗脱两个柱体积)，收集体积比3:1的石油醚-丙酮的流出液，浓缩至干用甲醇溶解后，再进行ODS C18柱层析，用体积比6:4的甲醇-水溶液洗脱，以氯仿-甲醇10:1(v/v)为展开剂进行薄层层析检测，收集Rf值为0.5的流出液，减压浓缩至干，即得式(1)所示聚酮化合物。

进一步，所述碳源为：葡萄糖、甘露醇、甘油、糊精或半乳糖中的一种或任几种，优选葡萄糖；所述氮源为黄豆粉、蛋白胨或马铃薯浸出粉中的一种或任几种，优选马铃薯浸出粉；所述无机盐为磷酸氢二钾或磷酸二氢钾，优选磷酸二氢钾。