[发明专利]一种精氨酸脱羧酶基因工程菌及其高密度发酵培养方法有效
申请号: | 201910596902.9 | 申请日: | 2019-07-02 |
公开(公告)号: | CN110229774B | 公开(公告)日: | 2020-12-08 |
发明(设计)人: | 袁建国;张言慧;高先岭 | 申请(专利权)人: | 山东国力生物科技有限公司;山东国力生物技术研究院 |
主分类号: | C12N1/21 | 分类号: | C12N1/21;C12N15/60;C12N9/88;C12P13/00;C12R1/19 |
代理公司: | 济南日新专利代理事务所(普通合伙) 37224 | 代理人: | 刘亚宁 |
地址: | 250100 山东省济南市高新*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 精氨酸 脱羧酶 基因工程 及其 高密度 发酵 培养 方法 | ||
1.一种精氨酸脱羧酶基因工程菌的高密度发酵培养方法,其特征在于,所述基因工程菌以E.ColiK12为宿主,以pET28A为载体,表达adiA基因;所述adiA基因核苷酸序列如SEQID NO.1所示;培养方法包括:种子液培养;将种子液接种到发酵培养基中,发酵诱导培养;补加碳源、氮源;控制溶氧量;碳源为甘油;氮源为氨水;
所述发酵培养基由以下成分及配比组成:甘油5~52g/L,蛋白胨8~45g/L,酵母粉2~36g/L,Na2HPO4·12H2O 6~50g/L,K2HPO4·3H2O 3~46g/L,磷酸二氢钾3~35g/L,氯化钠0.5~18g/L,硫酸镁0.5~15g/L,余量为水;
所述发酵诱导培养过程中,诱导剂为IPTG;
待发酵至溶氧开始回升时流加甘油,所用甘油浓度为40~60%,流加速率为0.2~30mL/(L·h),流加甘油总量为发酵培养基体积的10~30%;在发酵2~6h开始流加氨水,所用氨水浓度为14~28%,流加速率为0.1~5mL/(L·h),流加氨水总量为发酵培养基体积的1~8%;
所述发酵诱导培养过程中,诱导剂为IPTG,IPTG诱导浓度为0.3~0.6mmol/L,诱导时间为接种后5~8h;
搅拌转速为150~500rpm,通气量为1~2vvm,控制发酵液溶氧量为15~20%;
发酵过程中pH值控制在6.5~7.5。
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