[发明专利]基于固体纳米孔道的单酶检测分析方法在审
| 申请号： | 201910594847.X | 申请日： | 2019-07-03 |
| 公开（公告）号： | CN110218766A | 公开（公告）日： | 2019-09-10 |
| 发明（设计）人： | 龙亿涛;李巧;林瑶;应佚伦 | 申请（专利权）人： | 南京大学 |
| 主分类号： | C12Q1/26 | 分类号： | C12Q1/26;G01N27/26 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 王艳丽 |
| 地址： | 210046 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 纳米孔道 固体纳米 芯片 单酶 基底 催化 周期性电流 检测分析 金属层 孔道 单个酶分子 催化活性 构效关系 极化电压 外加电场 限域空间 信号分析 电极 离子流 酶底物 酶分子 纳米孔 内固定 生物酶 构象 分隔 连通 施加 监测 检测 分析 研究 | ||
1.一种基于固体纳米孔道的单酶检测分析方法，其特征在于，包括：
(1)在芯片上形成纳米孔道，所述芯片包括基底及设于基底上的金属层；
(2)在纳米孔道内固定单个酶分子，所述酶分子处于金属层靠近基底的一端；
(3)使芯片处于含酶底物的溶液中，芯片将所述溶液分隔为两部分，两部分的溶液通过纳米孔道连通，两部分溶液中分别放置电极，施加极化电压，监测周期性电流信号，进行信号分析，获得酶的催化信息；其中所述酶的催化信息包括酶的构象信息、酶的催化活性、酶的构效关系中的一种或几种。
2.根据权利要求1所述的基于固体纳米孔道的单酶检测分析方法，其特征在于，所述酶的催化活性包括酶随时间变化的活性动态。
3.根据权利要求1所述的基于固体纳米孔道的单酶检测分析方法，其特征在于，对周期性电流信号进行信号分析，获得基线电流值、信号频率、信号电流中的一种或几种，进一步获得所述酶的催化信息。
4.根据权利要求1所述的基于固体纳米孔道的单酶检测分析方法，其特征在于，所述纳米孔道的孔径为酶分子直径的1.3～3倍。
5.根据权利要求1所述的基于固体纳米孔道的单酶检测分析方法，其特征在于，所述金属层的厚度为30～50nm。
6.根据权利要求1所述的基于固体纳米孔道的单酶检测分析方法，其特征在于，所述金属层选自金、银、铜、铂中的一种或几种。
7.根据权利要求1所述的基于固体纳米孔道的单酶检测分析方法，其特征在于，所述基底与金属层之间设有过渡层。
8.根据权利要求1所述的基于固体纳米孔道的单酶检测分析方法，其特征在于，步骤(2)中，对纳米孔道内的金属层进行化学修饰，再固定酶分子。
9.根据权利要求1所述的基于固体纳米孔道的单酶检测分析方法，其特征在于，所述极化电压为酶分子氧化还原电位的1.5～3倍。
10.根据权利要求1所述的基于固体纳米孔道的单酶检测分析方法，其特征在于，所述酶为氧化还原酶。
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