[发明专利]一种铂类药物毒性反应标志物检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

本发明公开了一种铂类药物毒性反应标志物检测试剂盒及其检测方法和应用，其中，所述铂类药物毒性反应标志物检测试剂盒由高效扩增组和焦磷酸测序组组成，所述毒性标志物为CTR1基因rs10981694位点，其中：高效扩增组包括测序引物和Taq DNA聚合酶，扩增产物退火后经焦磷酸测序组测序。本发明采用本发明采用线性指数扩增的目标片段扩增方法，精准设计的扩增引物扩增效率高且错配少，直接扩增出单链DNA可直接用于焦磷酸测序，无需对扩增产物进行标记和双链分离，避免了繁冗的实验步骤，也减少了强碱性试剂对扩增片段的损伤。本试剂盒中的引物及实验方法均是经过精密的设计和测试得出的，适用于各种样本的CTR1的SNP位点检测，并且检测效率高，检测结果准确。

技术领域

本发明涉及一种铂类药物毒性反应标志物检测试剂盒及其检测方法和应用，属于检测试剂盒领域。

背景技术

铂类药物是作用较强的抗肿瘤药物，广泛应用于肺癌、大肠癌、卵巢癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤的治疗，取得了显著的疗效。铂类药物进入细胞后，与DNA结合形成加合物，造成DNA交联损伤，从而抑制细胞分裂，诱导细胞凋亡。铂类的药理作用不具有靶向性，在杀伤肿瘤细胞同时对机体正常细胞也会造成很大伤害，因此在临床应用中常导致严重的毒性反应，如神经毒性、肾毒性、胃肠毒性、骨髓抑制和耳毒性等。毒性反应带来的不适症状极大降低了患者的生活质量和对治疗的耐受程度。临床应用中发现，在化疗方案与用药剂量相同的情况下，化疗所致的毒性具有较大的个体差异，大部分患者具有轻中度的毒性反应，但有少数患者的毒性反应非常严重，可直接导致治疗中断甚至死亡。因此，为了提高铂类化疗药物的安全性和依从性，我们迫切需要一种能够预测化疗毒性反应发生风险的方法，以期实现铂类化疗的个体化用药。

铂类药物毒性反应的发生与其进入细胞的能力以及在细胞内的蓄积量密切相关。与药物摄入、排出相关的转运体在毒性的发生过程中发挥重要的作用。过去研究认为铂类药物在细胞内的摄取以及储存状况可以严重影响到铂类药物的化疗反应。新近的研究发现，铜离子蛋白转运家族是负责铂类药物从细胞外向细胞内转运和摄取的重要蛋白家庭，同时也与铂类药物的疗效以及和种毒副反应的发生有密切的相关性。而在为数不多的铜离子蛋白转运家庭成员中，CTR1蛋白(Copper transporter protein 1)起到了最关键的作用，其相应的生物学效应也最为显著。研究发现CTR1基因中的rs10981694多态性位点则与顺铂引起的严重毒副反应密切相关。拟设计一款以CTR1基因中的rs10981694多态性位点作为铂类药物毒性反应的生物标志物，便于在临床用药时铂类药物的用药指导和监测。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是获得一种铂类药物毒性反应标志物检测试剂盒及其检测方法和应用。

为实现上述发明目的，本发明采用的铂类药物毒性反应标志物检测试剂盒的技术方案如下：

所述铂类药物毒性反应标志物检测试剂盒由高效扩增组和焦磷酸测序组组成，所述毒性标志物为CTR1基因rs10981694位点，其中：高效扩增组包括测序引物和Taq DNA聚合酶，扩增引物序列如序列表SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，扩增产物退火后经焦磷酸测序组测序。

退火引物序列如序列表SEQ ID NO：3所示。

本发明中的测序引物特异性高、准确性好，序列用于线性指数PCR(LATE-PCR)可以大量产生便于焦磷酸测序的单链DNA，无需对常规的双链DNA进行解螺旋和分离。

引物序列中有一条为过量引物，一条为限制性引物，过量引物和限制性引物与正向引物和反向引物之间并无明确的制定关系，可以根据需要扩增的片段单链来选择扩增量，扩增量大的链对应的扩增引物即为过量引物，另一条链对应的扩增引物为限制性引物。