[发明专利]一种铂类药物毒性反应标志物检测试剂盒及其检测方法和应用在审
| 申请号： | 201910556113.2 | 申请日： | 2019-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN110628903A | 公开（公告）日： | 2019-12-31 |
| 发明（设计）人： | 叶婷;刘丹 | 申请（专利权）人： | 武汉菲思特生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 31253 上海精晟知识产权代理有限公司 | 代理人： | 安曼 |
| 地址： | 430205 湖北省武汉市东湖新技*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 扩增 焦磷酸测序 试剂盒 标志物检测 铂类药物 扩增产物 退火 强碱性试剂 测序引物 检测结果 扩增片段 扩增效率 扩增引物 目标片段 实验步骤 线性指数 单链DNA 标志物 检测 测序 错配 双链 位点 引物 精密 样本 损伤 测试 基因 应用 | ||
1.一种铂类药物毒性反应标志物检测试剂盒，其特征在于，所述铂类药物毒性反应标志物检测试剂盒由高效扩增组和焦磷酸测序组组成，所述毒性标志物为CTR1基因rs10981694位点，其中：高效扩增组包括测序引物和Taq DNA聚合酶，扩增引物序列如序列表SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，扩增产物退火后经焦磷酸测序组测序。
2.根据权利要求1所述的铂类药物毒性反应标志物检测试剂盒，其特征在于：所述扩增引物中一个为过量引物，另一个为限制性引物。
3.根据权利要求1所述的铂类药物毒性反应标志物检测试剂盒，其特征在于：所述过量引物的数量是限制性引物的至少10倍。
4.根据权利要求1所述的铂类药物毒性反应标志物检测试剂盒，其特征在于，高效扩增组还包括：扩增缓冲液、dNTPs和Mg2+。
5.根据权利要求1所述的铂类药物毒性反应标志物检测试剂盒，其特征在于，所述退火引物序列如序列表SEQ ID NO：3所示。
6.根据权利要求1所述的铂类药物毒性反应标志物检测试剂盒，其特征在于，焦磷酸检测组还包括：DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶、三磷酸腺苷双磷酸酶、dNTP，以及Klenow酶。
7.一种采用根据权利要求1～6任一项所述的铂类药物毒性反应标志物检测试剂盒的检测方法，其特征在于，所述方法包括：
a)提取DNA样本；
b)以提取出的DNA样本为模板，利用如序列表SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的扩增引物，进行线性指数PCR扩增；
c)将扩增产物进行退火处理，制备单链模板；
d)将制备好的单链模板进行焦磷酸测序，确定SNP位点的基因型。
8.根据权利要求7所述的铂类药物毒性反应标志物检测方法，其特征在于，所述线性指数PCR扩增的条件包括：95℃预变性5min，60℃扩增循环，72℃延伸10min，4℃保持。
9.根据权利要求1所述的铂类药物毒性反应标志物检测试剂盒，其特征在于：60℃扩增循环由87℃10s、66℃10s和72℃20s组成一个循环。
10.一种铂类药物毒性反应标志物的检测试剂盒的应用，其特征在于，所述检测试剂盒采用根据权利要求1～6任一项所述的检测试剂盒。
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