[发明专利]一种检测BCORL1基因内含子7基因突变的引物和方法

说明书

本发明公开了一种检测BCORL1基因内含子7区域51318 A＞AG位点突变的引物和方法，其包括(i)扩增BCORL1基因内含子7序列的引物；采用Sanger测序技术和测序引物。采用Sanger测序技术，可快速发现此突变位点。利用本发明完成的检测结果准确，可以辅助检查该区域的突变情况。本发明可快速地将BCORL1基因内含子7区域51318 A＞AG突变检测出来。利用本发明完成的检测结果准确，可以辅助诊断AML和再生障碍性贫血，对疾病的诊断和预后有重要的参考意义。

技术领域

本发明属生命科学和生物技术领域，特别涉及检测BCORL1基因内含子7 基因突变的引物和检测方法。

背景技术

BCORL1基因位于X染色体Xq25-q26.1细胞带，大约在129.14至129.19Mb 之间，含有13个外显子，编码1711个氨基酸，是一个转录共抑制因子。在大部 分人正常组织中BCORL1呈现低表达或表达缺失，仅仅在睾丸和前列腺组织呈 现高表达。

BCORL1基因的功能研究发现，其与Ⅱ类组蛋白脱乙酰基酶(histonedeacetylase，H D A C)存在相互作用，如HDAC4、HDAC5和HDAC7，BCOR1 通过结合启动子区域特定位点抑制E—cadherin基因转录，另外，BCORL1也 可以与c端结合蛋白(C—terminalbinding protein，CtBP)协同作用，发挥E —cadherin转录抑制功能。E—cadherin表达受损NSCIC、胃癌、肝细胞癌和卵 巢癌等肿瘤侵袭转移相关，而在包括NSCLC在内的多种肿瘤中，E—cadherin 启动子甲基化状态与其基因表达调控相关。提示BCORL1是一个肿瘤相关促进 基因。

80％BCORL1基因突变发生在原始细胞，细胞系中的所有BCORL1突变都 会截断编码蛋白，从而引起无义突变、剪接位点突变或插入或缺失。所有BCORL1 截断突变都被预测会导致缺乏LXXLL核受体募集模体和C端的多肽严重缩短。 BCORL1突变在AML发病机制中起重要作用，在6％的急性髓性白血病(AML) 患者以及21％的AML细胞系中的存在BCORL1基因突变，BCORL1是一个 新的候选肿瘤促进基因。

除此之外，BCORL1基因突变还和再生障碍性贫血(AA)有关，研究结果 显示，AA突变最常累及的5个基因为PIGA、BCOR/BCORL1、DNMT3A和 ASXL1。BCOR、BCORL1和PIGA基因突变在AA患者中更为显著，而JAK2、 RUNX1、TET2和TP53基因突变在AA中则相对少见。并且，AA患者基因突 变在位点分布上与MDS/AML有高度重叠，主要表现为移码、无义和剪接突变。因此，对再生障碍性贫血的患者检测BCORL1基因突变，有助于了解疾病进程， 而且AA高度特异性突变(如BCOR、BCORL1和PIGA突变)通常提示对免疫 抑制疗法有好的效果并预后良好，生存率高。

由此表明，BCORL1基因突变的检测对再生障碍性贫血疾病进程演变及预后 观测有重要的作用，尤其是在成人急性髓系白血病中的预后判断及治疗药物的选 择具有重要的指导意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测BCORL1基因内含子7突变热点的引物，采 用PCR技术，可用于快速检测患者体内BCORL1基因内含子7突变位点的情况。 所述检测BCORL1基因内含子7位点突变情况的引物，包括：

扩增BCORL1基因内含子7的引物，其碱基序列为：

BCORL1-Int7-F：TTTCCTGTTTCTTGCCTTCA

BCORL1-Int7-R：TTCCCATTCTGCAAATCCAC。

进一步地，还包括测序引物，其碱基序列为：

检测BCORL1基因内含子7的测序引物碱基序列为：