[发明专利]一种鉴别杏仁的试剂盒及鉴别方法

说明书

本发明涉及中药鉴别技术领域，尤其涉及一种鉴别杏仁的试剂盒及鉴别方法。该试剂盒中包括杏仁探针，探针连接有荧光标记。上述探针与模板结合的热动力学效能提高，使探针能够更好地与杏仁结合，而不与桃仁的DNA结合，重复性好，假阳性率低，与DNA杂交后即可通过荧光检测进行杏仁和桃仁的鉴别，操作简便快捷、成本低。

技术领域

本发明涉及中药鉴别技术领域，尤其涉及一种鉴别杏仁的试剂盒及鉴别方法。

背景技术

杏仁和桃仁均为常用中药，皆属为蔷薇科植物的干燥成熟的种子，并且二者形状、大小、颜色相似，特别是燀去种皮或加工成粉末后更不易区分，但杏仁是杏的种子，用于止咳润肺、降低胆固醇、抗肿瘤，而桃仁为桃或山桃的干燥成熟种子，用于活血祛瘀，润肠通便，止咳平喘，二者来源不同，功能、主治各异，不可混用，以免贻误治疗。因此鉴别杏仁与桃仁对于安全合理用药具有重要意义。目前中药常规鉴定方法有基原鉴定、性状鉴定、显微鉴定和理化鉴定等，但对于已被加工的中药饮片则有一定的局限性。

近年来，以DNA条形码为基础的分子鉴定方法快速发展，成为了继传统鉴定方法后的中药鉴定新方法。现有的分子鉴定技术多基于聚合酶链式反应(PCR)及测序技术：PCR获得ITS2序列后，通过对PCR产物进行测序、比对序列信息，从而能够区分正品和伪品。分子鉴定技术可以保证试验数据的可靠性，且重复性高，结果可靠，从分子水平进行鉴定不受样品的状态及采收加工影响。但是由于需要特殊而昂贵的测序仪器对其进行测序(一般需要由测序公司进行)，其经济成本及易用性限制了其推广的可能性。

后又有人利用荧光标记的方式，通过设计特异性引物，在PCR合成过程中于碱基间插入荧光标记以鉴别正品和伪品。该方法从一定程度上改善了原有技术的缺点，但是，全序列标记的荧光标记成本过高，且特异性引物的设计和筛选费时费力，针对不同的待鉴定中药很难获得相应的特异性引物，同样限制了此类技术的推广和应用。

发明内容

针对桃仁与杏仁饮片及粉末不易区分，以及现有技术中分子鉴定方法成本高、不易设计和筛选特异性引物的技术问题，本发明提供了一种鉴别杏仁的试剂盒。

以及，本发明还提供了鉴别杏仁的方法。

以及，本发明还提供了上述鉴别杏仁的试剂盒在鉴别杏仁与桃仁中的应用。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种鉴别杏仁的试剂盒，包括杏仁探针，所述杏仁探针连接有荧光标记；所述杏仁探针的序列为5′-AAAAAATTACC-3′(如SEQ ID NO.1所示)。

本试剂盒中的探针序列以杏仁与桃仁的ITS2差异序列中差异较大的序列为基础，经人工设计后得到。与根据差异序列直接得到的探针相比，上述探针与DNA模板结合的热动力学效能提高，能够更好地和杏仁DNA结合，而不与桃仁DNA结合，重复性好，假阳性率低。将探针与DNA杂交后，即可通过荧光检测进行杏仁与桃仁的鉴别。本试剂盒利用上述探针可获得准确的鉴别结果，可应用于杏仁与桃仁鲜材、饮片、粉末的鉴定，并有效降低了单次反应成本，且不需要特殊检测仪器，大大提升了检测手段的易用性，可在涉及杏仁和桃仁鉴别的科研机构、药房、医院、加工采收厂、中药供应商等地广泛应用。

优选地，所述试剂盒还包括植物ITS2引物，用于扩增杏仁和桃仁的基因组DNA。

优选地，所述荧光标记连接于所述探针的5′端。一个探针仅连接一个荧光标记，可有效降低荧光基团的使用量，降低成本。

优选地，所述荧光标记为Cy2荧光标记或AlexaFluor488荧光标记。

以及，本发明实施例还提供了一种鉴别杏仁的方法，用上述鉴别杏仁的试剂盒对杏仁进行鉴别。

优选地，具体操作为：扩增待测物的基因组DNA，扩增完成后加入上述杏仁探针进行杂交，然后电泳，荧光检测。