[发明专利]一种试剂盒及其用于定量检测Leber遗传性视神经病突变体的应用

权利要求书

1.一种试剂盒，包括SEQ ID NO.1～6。

2.如权利要求1所述的试剂盒，SEQ ID NO.1～6的各条带配比是SEQ ID NO.1: SEQ IDNO.2: SEQ ID NO.3=1~2:1~2:1~2, SEQ ID NO.4: SEQ ID NO.5: SEQ ID NO.6=1~2:1~2:1~2。

3.如权利要求1所述的试剂盒， SEQ ID NO.1～6的各条带配比为SEQ ID NO.1: SEQID NO.2: SEQ ID NO.3: SEQ ID NO.4: SEQ ID NO.5: SEQ ID NO.6=1~2:1~2:1~2: 1~2:1~2:1~2；更优选配比为SEQ ID NO.1: SEQ ID NO.2: SEQ ID NO.3: SEQ ID NO.4: SEQID NO.5: SEQ ID NO.6=1:2:1:1:1:2。

4.如权利要求1-3任一所述的试剂盒，包括SEQ ID NO.7～12。

5.如权利要求4所述的试剂盒，SEQ ID NO.7～12的各条带配比为SEQ ID NO.7: SEQID NO.8: SEQ ID NO.9: SEQ ID NO.10: SEQ ID NO.11: SEQ ID NO.12=1~2:1~2:1~2:1~2:1~2:1~2；优选的，SEQ ID NO.7: SEQ ID NO.8: SEQ ID NO.9: SEQ ID NO.10: SEQ IDNO.11: SEQ ID NO.12=1:1:2:2:1:1，或者SEQ ID NO.7: SEQ ID NO.8: SEQ ID NO.9:SEQ ID NO.10: SEQ ID NO.11: SEQ ID NO.12=1:1:1:1:2:2。

6.如权利要求1-5任一所述的试剂盒，包括SEQ ID NO.13～18。

7.如权利要求6所述的试剂盒，SEQ ID NO. 13-15的浓度分别为10⁸拷贝/ul，10⁷拷贝/ul，10⁶拷贝/ul，10⁵拷贝/ul，10⁴拷贝/ul；SEQ ID NO. 16-18，其浓度分别为10⁸拷贝/ul，10⁷拷贝/ul，10⁶拷贝/ul，10⁵拷贝/ul，10⁴拷贝/ul。

8.如权利要求1-7任一所述的试剂盒，包含2×浓度突变位点PCR检测预混液和2×浓度野生位点PCR检测预混液；

2×浓度突变位点PCR检测预混液配方包括：0.05 U/ul 热启动DNA聚合酶，100 mMKCl，4 mM MgCl₂，0.8 mM dNTP，4%ROX荧光校正染料，0.2uM SEQ ID NO.7，0.2uM SEQ IDNO.8，0.4uM SEQ ID NO.9，0.4uM SEQ ID NO.10，0.2uM SEQ ID NO.11，0.2uM SEQ ID NO.12，0.1uM SEQ ID NO.1，0.2uM SEQ ID NO.2，0.1uM SEQ ID NO.3；

2×浓度野生位点PCR检测预混液配方包括：0.05 U/ul 热启动DNA聚合酶，100 mMKCl，4 mM MgCl₂，0.8 mM dNTP，4%ROX荧光校正染料，0.2uM SEQ ID NO.7，0.2uM SEQ IDNO.8，0.2uM SEQ ID NO.9，0.2uM SEQ ID NO.10，0.4uM SEQ ID NO.11，0.4uM SEQ IDNO.12，0.1uM SEQ ID NO.4，0.1uM SEQ ID NO.5，0.2uM SEQ ID NO.6。