[发明专利]肺癌突变位点的突变率的检测方法及试剂盒

说明书

本发明公开一种肺癌突变位点的突变率的检测方法，其包括：(1)对肺癌患者外周血的血浆样本进行cfDNA的提取，获得cfDNA提取物；(2)针对肺癌相关的EGFR L858R位点设计第一突变型检测探针(序列为SEQ ID NO:5)和第一野生型检测探针(序列为SEQ ID NO:6)、第一引物(序列为SEQ ID NO:1)和第二引物(序列为SEQ ID NO:2)，并且针对肺癌相关的EGFR 19号外显子缺失位点设计第二突变型检测探针(序列为SEQ ID NO:7)、第二野生型检测探针(序列为SEQ ID NO:8)、第三引物(序列为SEQ ID NO:3)和第四引物(序列为SEQ ID NO:4)；(3)以cfDNA提取物为模板，进行ddPCR检测，获得含有敏感性突变位点的扩增产物；(4)对扩增产物进行数据分析，获得EGFR敏感性突变L858R和19Del的突变率。由此，能够灵敏地获得EGFR敏感性突变L858R和19Del的突变率。

本申请是申请日为2017年10月24日、申请号为201711003578.2、发明名称为一种肺癌EGFR L858R和19Del的ddPCR检测方法及应用的专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及医学和生物技术领域，具体涉及一种肺癌突变位点的突变率的检测方法及试剂盒。

背景技术

肺癌是最常见的肺原发性恶性肿瘤，绝大多数肺癌起源于支气管粘膜上皮，故亦称支气管肺癌。近50多年来，世界各国特别是工业发达国家，肺癌的发病率和死亡率均迅速上升，是全世界发病率和死亡率最高的恶性肿瘤，5年生存率仅为16.8％，每年新确诊肺癌患者达到160万，肺癌同时也是癌症患者死亡的首要病因，每年有140万人口死于肺癌。

目前，传统的肺癌治疗方式有：外科手术治疗、放疗和化疗等。外科手术治疗虽然可以切除肿瘤，但是手术过程中可能无法完全切除或引起肿瘤转移，还可能造成器官损伤及身体免疫力降低；化疗是一种全身性的治疗，效果明显和迅速，但是在杀伤肿瘤细胞的同时也可能会把正常细胞一起杀灭，所以，化疗算得上是一种“玉石俱焚”的治疗方法；放疗在某些肿瘤方面可以达到手术切除的效果，但放疗成本高，周期长，并发症也较多。

靶向治疗作为一种新兴治疗手段，由于其毒性小，副作用少并且能够大大提升患者生存周期以及生活质量而得到广泛的应用。然而靶向药物的选择依赖于患者的基因分型，靶向药物往往有其对应的靶基因，当该基因发生突变时某条调控细胞增殖分裂的信号通路被持续激活，或者是调控细胞凋亡的信号通路被抑制，当使用相应的靶向药物之后，该通路被阻断，肿瘤细胞被杀死。因此针对肺癌的靶基因以及其驱动基因的检测技术的开发是应用靶向治疗的基础。

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor，EGFR)是靶向治疗的重要作用靶点，目前针对EGFR的靶向药物包括EGFR抗单克隆抗体药爱必妥、帕尼单抗，以及EGFR酪氨酸激酶抑制剂易瑞沙和特罗凯。其中，针对酪氨酸激酶抑制剂靶向药物的使用还要参照EGFR酪氨酸激酶抑制剂敏感性突变，最常见的敏感性突变包括EGFR L858R突变和EGFR 19Del。这些突变使患者对EGFR-TKI(tyrosine kinase inhibitor，酪氨酸激酶抑制剂)敏感，对肺癌患者靶向药物的选择具有指导意义，如果野生型患者采用EGFR-TKI治疗，会增加41％疾病进展风险的概率。因此，检测EGFR基因突变情况，筛查获益人群，将大大提高药物的效率并节约资源。

肿瘤的治疗效果与肿瘤的早期发现有很大的关系，由于肺癌肿瘤细胞倍增时间短、进展快，非小细胞肺癌患者中，约75％的患者发现时已处于中晚期，5年生存率很低，因此肺癌检出越早越有利于治疗，因此研发一种为肺癌早期诊断提供参考信息的检测技术迫在眉睫。