[发明专利]肺癌突变位点的突变率的检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种肺癌突变位点的突变率的检测方法，其特征在于，包括：

(1)对肺癌患者外周血的血浆样本进行cfDNA的提取，获得cfDNA提取物；

(2)针对肺癌相关的EGFR L858R位点设计第一突变型检测探针和第一野生型检测探针、第一引物和第二引物，并且针对肺癌相关的EGFR 19号外显子缺失位点设计第二突变型检测探针、第二野生型检测探针、第三引物和第四引物；

(3)以所述cfDNA提取物为模板，进行ddPCR检测，获得含有敏感性突变位点的扩增产物；

(4)对所述扩增产物进行数据分析，获得EGFR敏感性突变L858R和19Del的突变率，

其中，所述第一突变型检测探针的序列为SEQ ID NO:5，所述第一野生型检测探针的序列为SEQ ID NO:6，所述第一引物的序列为SEQ ID NO:1，所述第二引物的序列为SEQ IDNO:2，并且

所述第二突变型检测探针的序列为SEQ ID NO:7，并且所述第二野生型检测探针的序列为SEQ ID NO:8，所述第三引物的序列为SEQ ID NO:3，所述第四引物的序列为SEQ IDNO:4。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，

在步骤(1)中，采用所述两步纯化法抽提血浆cfDNA。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，

在步骤(1)中，所述两步纯化法为：采用异丙醇沉淀cfDNA，去除杂质，然后采用无水乙醇沉淀cfDNA，去除杂质之后，去离子水进行洗脱，以获得包含cfDNA模板的洗脱液。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，

在步骤(2)中，所述第一突变型检测探针、所述第一野生型检测探针、所述第二突变型检测探针和所述第二野生型检测探针的3’端均具有MGB-NFQ修饰。

5.根据权利要求1或4所述的检测方法，其特征在于，

所述第一野生型检测探针和所述第二野生型检测探针的5’端均具有FAM荧光基团修饰，并且所述第一突变型检测探针和所述第二突变型检测探针的5’端具有HEX荧光基团修饰。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，

在步骤(4)中，所述数据分析包括荧光阈值的确定、检测阈值的确定、以及阴阳性结果的判读。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，

所述荧光阈值的确定包括空白对照组和阴性对照组荧光阈值的确定；所述检测阈值的确定包括最低检测限的阳性对照组阈值的确定；所述阴阳性结果的判读包括依据阴性对照组、最低检测限的阳性对照组以及强阳性对照组的数据分析对检测结果进行分析、判定。

8.一种检测肺癌突变位点的突变率的试剂盒，其特征在于，是根据权利要求1至7中的任一项所述的检测方法检测的试剂盒。

9.一种检测肺癌突变位点的突变率的试剂盒，其特征在于，

包括针对肺癌相关的EGFR L858R位点设计第一突变型检测探针和第一野生型检测探针、第一引物和第二引物，并且针对肺癌相关的EGFR 19号外显子缺失位点设计第二突变型检测探针、第二野生型检测探针、第三引物和第四引物。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，

所述第一突变型检测探针的序列为SEQ ID NO:5，所述第一野生型检测探针的序列为SEQ ID NO:6，所述第一引物的序列为SEQ ID NO:1，所述第二引物的序列为SEQ ID NO:2，并且

所述第二突变型检测探针的序列为SEQ ID NO:7，并且所述第二野生型检测探针的序列为SEQ ID NO:8，所述第三引物的序列为SEQ ID NO:3，所述第四引物的序列为SEQ IDNO:4。