[发明专利]一种鉴定辣椒CMS雄性不育恢复基因的KASP分子标记、试剂盒及其应用

说明书

本发明提供一种鉴定辣椒CMS雄性不育恢复基因的KASP分子标记、试剂盒及其应用，涉及分子标记辅助育种技术领域，所述KASP分子标记由包括上游引物F1、上游引物F2和下游引物R的引物组扩增得到。利用本发明所述KASP分子标记可快速完成对辣椒CMS分离群体中的育性鉴定，快速判断辣椒是否含有CMS育性恢复基因，可进行批量实验，节省了大量人力，特别适用于大量样本的操作。本发明提供了鉴别辣椒CMS恢复基因的试剂盒以及鉴别方法准确性高。

技术领域

本发明涉及分子标记辅助育种技术领域，尤其涉及一种鉴定辣椒CMS雄性不育恢复基因的KASP分子标记、试剂盒及其应用。

背景技术

辣椒利用CMS(Cytoplasmic male sterility)三系配套制种可以省去人工去雄，提高种子纯度，同时有利于知识产权的保护。但是，如果父本的育性恢复力不强，则会严重影响F1的果形和产量(王立浩，2007)。因此，选育恢复性强、配合力高、农艺性状优良的恢复系(父本)成为辣椒CMS在杂种优势利用中急需解决的主要问题之一(沈火林和石正强，2002)。传统的辣椒CMS育性基因选择是根据测交组合的育性表现进行筛选。分子标记辅助选择可直接反映不同材料DNA的多态性差异，并且选择不受时间和环境的影响(华明艳等，2008)。通过育性紧密连锁的分子标记直接进行育性基因的选择，可以有效加快恢复系的筛选进程。目前，分子标记辅助育种技术已在多种作物的CMS恢复系选育中得到应用，在杂交后代(或花药再生植株)苗期鉴定有Rf基因的个体，短时间内即可在室内检测大量样品，显著提高育种的选择效率(王俊霞等,2000；刘保申等,2002；华明艳等,2008)。众多研究认为辣椒育性恢复是由主效恢复基因Rf控制，另外还受修饰基因和环境因素的影响(Zhang etal.,2000；GμLyas et al.,2006)。

Zhang等(2000)采用RAPD技术发现位于Rf基因两侧的标记OP131400(0.37cM)和OW19800(8.12cM)；Kim(2005)将分子标记OPP131400转化为更容易操作的OPP13-CAPS(HinfI)标记，此标记为显性标记且通用性较强。Lee等(2004)和GμLyas等(2006)利用与Rf基因连锁的RAPD标记OPT-02/570(5cM)开发出一个STS标记CRF-SCAR。Kim等(2006)成功地将AFLP标记AFRF8转化成一个与Rf基因紧密连锁的共显性CAPS标记AFRF8CAPS(1.8cM)。Lee等(2008a)发现在辣椒中存在部分可育(pr)现象，利用AFLP-BSA方法开发出1个与pr基因连锁的分子标记PR-CAPS(1.8cM)，可用于部分育性材料的去除。常彩涛等(2005)利用BSA分析法筛选得到PCR标记S4181515，并证明其能用于候选育性材料的初筛。Min等(2009)利用AFLP技术开发了3个与Rf基因连锁的标记AFRF1、AFRF3和AFRF4，并转化为可用于PCR的标记类型。杨娟等(2010)发现AF208834标记与Rf基因连锁，遗传距离为20.8cm。Jo等(2010)利用矮牵牛Rf基因筛选辣椒BAC文库开发出连锁标记BAC13T7SCAR(1.4cM)。吴国平等(2012)以甜椒为试材，利用SRAP分子标记技术筛选得到一个与甜椒恢复基因相关的分子标记，并成功地将此SRAP标记转化为简单、稳定的SCAR标记。