[发明专利]一种通过扩增16S rDNA保守区序列检测细菌的方法在审
| 申请号： | 201811631519.4 | 申请日： | 2018-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN109554441A | 公开（公告）日： | 2019-04-02 |
| 发明（设计）人： | 赵简;雷颖;白志慧;张守梅 | 申请（专利权）人： | 同济大学;上海思济细胞技术中心（有限合伙） |
| 主分类号： | C12Q1/6851 | 分类号： | C12Q1/6851;C12Q1/689;C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 上海骁象知识产权代理有限公司 31315 | 代理人： | 林炜 |
| 地址： | 200092 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 保守区序列 细菌 扩增 待检测样本 标准曲线 反向引物 正向引物 阈值设定 标准品 检测 | ||
【权利要求书】：
1.一种通过扩增16S rDNA保守区序列检测细菌的方法，其特征在于包括如下步骤：
1)利用RT-PCR方法扩增标准品的16S rDNA部分保守区序列，所述的标准品为含有16SrDNA部分保守区序列的pUC57质粒，所述的16S rDNA部分保守区序列如SEQ ID NO.6所示，采用的正向引物如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3或者SEQ ID NO.4所示；反向引物如SEQ ID NO.5所示；
2)在定量PCR反应体系中加入200nM的正向引物，200nM的反向引物，再加入模板；通过测量不同拷贝数的CT值结果，建立拷贝数/μl与CT值的标准曲线；反应条件分为三个阶段，第一阶段为预变性阶段，95℃10min；第二阶段为PCR反应阶段，95℃20s，58℃30s，72℃30s；第三阶段扩增产物熔解阶段，95℃15s，60℃1min，95℃15s，60℃15s；
3)利用RT-PCR方法，采用上述的方法扩增待检测样本，根据待检测样本的CT值来计算细菌的浓度。
2.根据权利要求1所述的一种通过扩增16S rDNA保守区序列检测细菌的方法，其特征在于：在检测的过程中，待检测样本采用100℃预处理10min。
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