[发明专利]一种线粒体基因组测序引物、试剂盒及方法

权利要求书

1.线粒体基因组检测的引物对组合，其包括3组扩增引物对，分别是：

SEQ ID NO：1和2、SEQ ID NO：3和4、SEQ ID NO：5和6。

2.根据权利要求1所述的引物对组合，其中扩增引物对的部分或全部引物连接有barcode序列，以在扩增时用于区分不同样品。

3.一种试剂盒，其包含权利要求1或2所述的引物对组合。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括基因组DNA提取体系、PCR反应缓冲液、无核酸酶的水、DNA聚合酶、分子量marker中的一种或多种；所述DNA聚合酶选自Taq、Bst、Vent、Phi29、Pfu、Tru、Tth、Tl1、Tac、Tne、Tma、Tih、Tf1、Pwo、Kod、Sac、Sso、Poc、Pab、Mth、Pho、ES4 DNA聚合酶、Klenow片段中的任一种。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括末端修复酶、末端修复缓冲液、扩增或连接接头、DNA连接酶中的一种或多种。

6.一种线粒体基因组测序方法，其特征在于，包括：

a）使用权利要求1或2所述的引物对组合或权利要求3~5任一项所述的试剂盒扩增人线粒体基因组DNA得到扩增产物；以及

b）用三代测序平台对扩增产物进行检测；

c）对测序结果的序列拼接；

在进行三代测序时，对所述扩增产物的两端连接用于区分不同样品的barcode序列以构建三代测序的文库模型并上机测序；所述三代测序采用PacBio Sequel、PromethION、MinION、GridION任一平台进行。

7.权利要求1或2所述的引物对组合或权利要求3~5任一项所述的试剂盒在制备人线粒体缺陷相关疾病的诊断剂中的应用；所述人线粒体缺陷相关疾病为线粒体肌病脑病伴乳酸中毒及中风样发作、线粒体糖尿病或Leber遗传性视神经病。