[发明专利]HLA-DQB1基因分型试剂盒

说明书

本发明公开了HLA‑DQB1基因分型试剂盒，包括1对特异性扩增引物，如SEQ ID NO.1、2所示，以及4条寡核苷酸测序引物，如SEQ ID NO.3～6所示。本发明还公开了HLA‑DQB1基因分型的检测方法：提取待检测样本基因组DNA，利用SEQ ID NO.1、2所示的扩增引物进行PCR扩增，然后利用SEQ ID NO.3～6所示的测序引物进行测序，从而确定HLA‑DQB1等位基因型。本发明的试剂盒和方法，一次完成HLA‑DQB1基因2、3外显子的扩增，然后对2、3外显子分别进行双端测序，步骤简单，分型速度快，分型准确，3天内可出具报告，且可兼容于一代及二代测序平台，应用广泛。

技术领域

本发明涉及HLA-DQB1基因分型试剂盒，属于分子生物技术和基因检测领域。

背景技术

人类白细胞抗原(HLA)是迄今为止人类最复杂遗传系统，具有高度的多态性。准确的HLA分型技术和分型数据已被广泛应用于器官和造血干细胞移植中寻找HLA相匹配的供者、HLA与疾病相关性的研究、亲子关系鉴定、个体识别以及以肽为基础的病毒和癌症疫苗的研发等应用领域。供受者间HLA等位基因的配合程度与移植效果密切相关。研究发现，移植时，供受双方的HLA相关基因匹配程度越高，分辨率越高，移植物的存活时间越长，因此，精确的HLA分型有助于提高移植后的存活率。

目前以DNA为基础的HLA基因分型方法已得到广泛应用，其中直接测序分析基础上的基因分型技术(PCR-SBT)是WHO推荐的高分辨水平HLA基因分型的实验方法，被认为是HLA基因分型的金标准，可直接获得DNA序列，鉴定所有存在的多态性，是最直接、最直观的方法。随着基因测序仪的普及和临床移植配型的要求，PCR-SBT方法在大规模的HLA分型中逐渐被广泛采用。

根据HLA基因结构和分布的特点，分为HLA-Ⅰ、HLA-Ⅱ和HLA-Ⅲ等三类分子，其中HLA-Ⅰ类分子和HLA-Ⅱ类分子功能主要与免疫排斥相关，HLA-Ⅲ类分子功能主要与免疫相关的部分补体系统以及炎症相关因子等的合成相关。HLA-DQB1属于HLA-Ⅱ类分子，其基因长度7kbp左右，由6个外显子和5个内含子组成。近二十多年，DQB1与移植配型的关系在临床上一直得到应用，而且，近年来，越来越多的研究发现，HLA-DQB1的某些亚型与多种疾病存在密切的关联性。系统性红白狼疮患者DQB1*0601等位基因频率较正常人显著升高，预示着DQB1*0601可能是系统性红白狼疮的易感基因；白癜风患者DQB1*0303等位基因的检出率明显高于健康人，HLA-DQB1基因可能与白癜风遗传易感体质相关；DQB1*0201等位基因与新疆维吾尔族人群中的结核病存在较强的关联性，提示，DQB1*0201可能是其易感基因；DQB1*03032和DQB1*0602型儿童，幽门螺杆菌感染发展为慢性胃炎概率显著低于其它基因型别，提示着遗传保护因素的作用；DQB1*0602基因为中国发作性睡病人群的易感基因，DQB1*0401-0402基因为中国发作性睡病人群的保护基因等等。因此，HLA-DQB1的分型检测不仅仅运用于组织配型，还可为临床医生确诊某些病症及治疗方向提供一些指导意见。

目前DQB1成品分型试剂盒大部分是分别扩增2和3外显子，并对扩增产物进行外显子双端测序，此方法可以达到准确分型的目的，但是扩增步骤稍繁琐。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种用于HLA-DQB1基因分型的组特异性引物PCR-SBT试剂。本发明还提供了一种HLA-DQB1基因分型的组特异性引物PCR-SBT方法。通过本发明的HLA分型试剂盒及方法能简化实验步骤，高效且准确地完成HLA配型，能大大提高配型效果，使患者康复更快，更有保障。该发明在检测通量、数据质量、成本控制等方面都有质的飞跃，可兼容于一代和二代测序平台。

本发明是通过以下技术方案实现的：

HLA-DQB1基因分型试剂盒，包括用于扩增的1对特异性扩增引物，以及用于测序分析的4条寡核苷酸测序引物，其在DQB1基因上的位置如图1所示；其中，1对特异性扩增引物的核苷酸序列如下：