[发明专利]HLA-DQB1基因分型试剂盒在审
| 申请号： | 201811597487.0 | 申请日： | 2018-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN109371114A | 公开（公告）日： | 2019-02-22 |
| 发明（设计）人： | 周云丽;张倩;王林林;刘克瑶 | 申请（专利权）人： | 银丰基因科技有限公司;银丰生物工程集团有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6881 | 分类号： | C12Q1/6881;C12N15/11 |
| 代理公司： | 山东舜天律师事务所 37226 | 代理人： | 李新海 |
| 地址： | 250101 山东省济南市高*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基因分型试剂盒 测序引物 外显子 测序 分型 特异性扩增引物 待检测样本 等位基因型 基因组DNA 测序平台 寡核苷酸 基因分型 扩增引物 一次完成 试剂盒 扩增 双端 兼容 基因 检测 应用 | ||
1.HLA-DQB1基因分型试剂盒，其特征在于：包括1对特异性扩增引物，以及4条寡核苷酸测序引物，其中，所述1对特异性扩增引物的核苷酸序列如下：
Amp-DQB1-F：5’-CTCCTTCTAACATCCTGTGTG-3’；如SEQ ID NO.1所示；
Amp-DQB1-R:5’-CAGGATTCTTCTGATGCACT-3’；如SEQ ID NO.2所示；
所述4条寡核苷酸测序引物的核苷酸序列如下：
DQB1-2F：5’-CGCGGGCKGTTCCACAGCTC-3’；如SEQ ID NO.3所示；
DQB1-2R：5’-GGCGACGMCGCTCACCTC-3’；如SEQ ID NO.4所示；
DQB1-3F：5’-GGAGCCCACAGTGACCATCTC-3’；如SEQ ID NO.5所示；
DQB1-3R：5’-CCCATAGTAACAGAAACTCAA-3’；如SEQ ID NO.6所示。
2.权利要求1所述的HLA-DQB1基因分型试剂盒在检测HLA-DQB1基因分型中的应用。
3.HLA-DQB1基因分型的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)提取待检测样本基因组DNA；
(2)利用SEQ ID NO.1、2所示的扩增引物，PCR扩增基因组DNA中HLA-DQB1不同等位基因型序列；
(3)对扩增产物进行双酶切纯化；
(4)利用SEQ ID NO.3～6所示的测序引物，对上述纯化产物进行测序PCR反应；
(5)将上述得到的测序产物进行醋酸钠-乙醇沉淀法纯化，进行毛细管电泳测序；
(6)将上述获得的序列通过软件分析，确定HLA-DQB1等位基因型。
4.根据权利要求3所述的HLA-DQB1基因分型的检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中，PCR扩增反应条件为：
94℃，1min；
98℃，10s→56℃，30s→72℃，4min，重复30个循环；
72℃,10min；
4℃，∞。
5.根据权利要求3所述的HLA-DQB1基因分型的检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中，纯化所需的两种酶为虾碱性磷酸酶和核酸外切酶。
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