[发明专利]一种反义肽核酸-DNA四面体载体复合物及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种反义肽核酸‑DNA四面体载体复合物，其中，反义肽核酸和DNA四面体的摩尔比为1:1；所述反义肽核酸是靶向金黄色葡萄球菌基因的反义肽核酸。本发明还提供了所述复合物在制备抗金黄色葡萄球菌药物中的用途。本发明的复合物可以有效抑制“超级细菌”MRSA的增殖，安全可靠，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及载药体系领域，具体涉及一种反义肽核酸-DNA四面体载体复合物及其制备方法和应用。

背景技术

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)，该菌株来源于北京朝阳医院，编号为18908的临床实验株，该菌株是临床上常见的毒性较强的细菌，其具有不均一耐药性，以及广谱耐药性，是一种临床上常见的感染病菌。这类菌株所导致的临床感染治疗失败率较高，被称作“超级细菌”。

在目前的研究中，治疗MRSA感染的药物的靶标多是一些常见的细胞因子，如黏附性因子，影响细胞壁合成因子等，采用这类靶标的药物特点是，容易使其产生耐药性，所以需要从新的角度选择药物作用靶点。

反义肽核酸是一种人工合成的DNA类似物，可根据碱基互补配对原则特异性的抑制基因的表达。由于其为电中性，且不存在磷酸基团，所以不存在电性相斥的现象，导致与DNA/RNA结合能力更强，不被核酸酶和蛋白酶水解，从而避免了天然DNA和RNA寡核苷酸作为靶向探针可能导致许多脱靶效应的现象。但是，正是由于反义肽核酸(asPNA)不带电荷，无法像核酸一样通过内吞作用进入细胞，难以发挥药效活性，如何将反义肽核酸送入细胞内是本领域一直期望解决解决的难题。

目前，科研人员尝试了多种方法，然而，结果并不尽如人意，现有许多载体均难以将反义肽核酸载入细胞内，发挥药效。目前仅见到采用细胞穿膜肽连接反义肽核酸，将其送入细胞内发挥药效的报道，但是效果仍然不佳，体外实验中，在细胞穿膜肽和反义肽核酸的浓度达到微摩尔级别时才能起效，且药效活性弱，另外，细胞穿膜肽本身具有一定的细胞毒性，浓度达到微摩级别时可能会对动物体或人体有害，使得该载体搭载asPNA用于对抗细菌感染时存在非常大的安全隐患。

DNA四面体(TDNs)，是由四条特别设计过的无义序列的单链DNA(ssDNA)S1、S2、S3、S4通过自组装形成的具有三维结构的DNA纳米材料，四条单链序列遵循“碱基互补配对原则”，合成方法简单，产率高。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种新型的复合物，可以用于抑制包括超级细菌MRSA在内的金黄色葡萄球菌。

本发明提供了一种反义肽核酸-DNA四面体载体复合物，所述反义肽核酸是靶向金黄色葡萄球菌基因的反义肽核酸；组成所述DNA四面体的单链DNA序列如SEQ ID NO.1-4所示。

进一步地，所述反义肽核酸和DNA四面体的摩尔比是1∶1。

进一步地，所述金黄色葡萄球菌基因是ftsZ基因。

进一步地，所述反义肽核酸的序列如SEQ ID NO.5所示。

进一步地，所述反义肽核酸在复合物中与S3单链的第27-38位碱基由氢键互补配对连接，所述S3单链的序列如SEQ ID NO.3所示。

本发明还提供了前所述复合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将所述反义肽核酸与组成DNA四面体的每条单链加入到pH值为8的缓冲溶液中，95℃维持10min，再冷却至4℃维持20min，即得。

进一步地，所述缓冲溶液含有10mM Tris-HCl和50mM MgCl2。

本发明还提供了前述复合物在制备抗金黄色葡萄球菌的药物中的应用。

进一步地，所述金黄色葡萄球菌为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。