[发明专利]大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌的体外抑制作用的研究方法

说明书

本发明公开了大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌的体外抑制作用的研究方法，(1)制备大千生醇提取液：分别将40g的种子、茎和根的粉末加入到1000ml的锥形瓶中，然后在锥形瓶内加入800ml 40％的乙醇，在功率150W、60℃超声波进行提取40min后取出。本发明提供了大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌的体外抑制作用的研究方法，在10g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在2.5g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在1.25g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在0.625g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞茎＞种子，由此可见，根所产生的总黄酮对大肠杆菌抑制最好，解决了现有技术中无法得知大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌抑制的功效。

技术领域

本发明涉及大千生技术领域，尤其涉及大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌的体外抑制作用的研究方法。

背景技术

大千生是茄科植物假酸浆属的一年生直立草本植物，又称假酸浆，天珠等，在我国南北均有作药用或欣赏栽培，大千生植物中的根、茎、花和种子，全草味甘、淡、微苦、性平，它的功效是镇静、祛痰和清热解毒等，对发热、热淋、疮痈肿痛、风湿关节炎等疾病有很大的治疗效果，而且大千生中总黄酮对大肠杆菌有抑制作用，但是现有技术中无法得知大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌抑制的功效，为此我们提出大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌的体外抑制作用的研究方法。

发明内容

本发明的目的在于提供大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌的体外抑制作用的研究方法，以解决上述背景技术中提出的问题

本发明提供如下技术方案：大千生不同部位总黄酮对大肠杆菌的体外抑制作用的研究方法，包括如下步骤：

(1)制备大千生醇提取液：分别将40g的种子、茎和根的粉末加入到1000ml的锥形瓶中，然后在锥形瓶内加入800ml 40％的乙醇，在功率150W、60℃超声波进行提取40min后取出，用抽滤机对其溶液进行除杂，再用旋转蒸发仪对其溶液进行浓缩，浓缩至70ml的提取液放入1000ml的锥形瓶中，对其提取液进行除糖，除糖后进行旋转蒸发仪再次浓缩，浓缩至4ml后取出放置在具塞试管中，所得提取液就为各个部位的10g/ml的提取液；

(2)制作培养基：准备牛肉膏7.5g，蛋白胨10g，NaCl7.5g，琼脂粉20g，水1000ml，将其药品加热混匀于1000ml的水中，调PH7.4-7.6，放入1000ml锥形瓶中，放进高压蒸汽灭菌锅内，于0.1MPa121℃高压灭菌20min，待压强为零，打开排气阀，取出，在超净工作台上进行培养基制备，放凉后放进冰箱中备用；

(3)培养大肠杆菌：在超净工作台上，向牛肉膏蛋白胨培养基中划线接种大肠杆菌，至于37℃电热恒温培养箱中培养24h；

(4)抑菌程度实验：将大肠杆菌分别放入到10g/ml、51g/ml、2.5g/ml、1.25g/ml和0.625g/ml的提取液内；

(5)实验结果：在10g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞茎＞种子；在5g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在2.5g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在1.25g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞种子＞茎；在0.625g/ml的浓度下抑菌程度大小为：根＞茎＞种子。

优选的，所述步骤(3)中在超净工作台上，向试管中加入生理盐水，在生理盐水中加入复苏的大肠杆菌，制成大肠杆菌混悬液，用紫外分光光度计在0D625值的条件下，测其值在0.08-0.13(0.5麦氏浊度)之内。

优选的，所述步骤(3)中在超净工作台上，用移液枪一次性取0.1ml的大肠杆菌混悬液均匀布于牛肉膏蛋白胨培养基平板上，用涂布器均匀涂布在牛肉膏蛋白胨培养基上。