[发明专利]一种免DNA提取的快速SNPs基因分型新方法

说明书

本发明提供一种免DNA提取的快速SNPs基因分型新方法，包括正向引物和反向引物，所述正向引物包括如SEQ ID NO.1‑8、SEQ ID NO.10‑11所示片段中的至少一种，所述反向引物包括如SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.12所示片段中的至少一种。本发明成功构建了免DNA提取的基于等位特异性DNA酶自组装的比色新方法用于SNPs基因型快速、即时检测，并成功用于口腔拭子中MTHFR基因第677位点基因型的快速分子检测。该方法是一种快速、简便的SNPs基因分型新方法，可为个体化用药分子诊断的推广应用提供新的技术支持，具有广阔的临床应用前景。

技术领域

本发明涉及核酸检测技术领域，特别是涉及一种免DNA提取的快速SNPs基因分型新方法。

背景技术

个体化用药(personalized medicine)，即药物治疗“因人而异”、“量体裁衣”，在充分考虑每个病人的遗传因素(即药物代谢基因类型)、性别、年龄、体重、生理病理特征以及正在服用的其它药物等综合情况的基础上制定安全、合理、有效、经济的药物治疗方案。因此，个体化用药必须依赖于药物代谢相关的单核苷酸多态性(single nucleotidepolymorphisms，SNPs)基因型来指导合理用药。

目前，SNPs基因型的检测方法有金标准的DNA测序、高分辨率溶解曲线、限制性酶切片段多态性和一些DNA传感技术。但这些方法均需提取外周血细胞DNA，增加了交叉污染的可能性，并且该操作需要专业的实验操作人员和高要求的实验室条件，因此限制了个体化用药在基层医院或诊所的开展。为了解决以上问题，逐渐出现一些直接用全血进行PCR扩增来检测SNPs基因型，比如利用荧光共振能量转移原理的实时荧光PCR的方法，但该方法需要设计价格昂贵的荧光探针以及需要专业的荧光PCR仪进行检测。还有的方法则为直接用全血PCR后进行限制性酶切电泳检测，该方法步骤繁琐，更重要的限制条件是需要有特殊的酶切位点才能利用此方法。虽然直接利用全血进行PCR扩增减少了实验步骤，但抽血的过程仍会引起身体的不适。

因此，研究开发简单、快速、无创的SNPs基因型检测技术对个体化用药和精准治疗具有重要的临床意义。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种免DNA提取的快速SNPs基因分型新方法，用于解决现有技术中SNPs基因型检测方法操作繁琐、需要提取外周血细胞DNA、成本高昂等问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明第一方面提供一种免DNA提取的快速SNPs基因型检测引物，包括正向引物和反向引物，所述正向引物包括如SEQ ID NO.1-8、SEQID NO.10-11所示片段中的至少一种，所述反向引物包括如SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.12所示片段中的至少一种。

本发明第二方面提供一种用于检测SNPs基因型的试剂盒，包括上述引物。

在本发明的一些实施例中，还包括DNA聚合酶。

在本发明的一些实施例中，所述DNA聚合酶选自KOD FX DNA聚合酶。

在本发明的一些实施例中，还包括酶缓冲液、dNTPs。

本发明第三方面提供上述引物或试剂盒在免DNA提取的SNPs基因型检测中的应用。

在本发明的一些实施例中，所述SNPs基因型包括MTHFR基因第677位点基因型。

本发明第四方面提供免DNA提取的SNPs基因型检测的方法，包括如下步骤：

1)设计引物序列；

2)将靶物质加入到含有正向引物、反向引物、DNA聚合酶、酶缓冲液、dNTPs、水的混合液中进行PCR反应；

3)测定步骤2)所得反应液的比色信号。