[发明专利]一种免DNA提取的快速SNPs基因分型新方法

权利要求书

1.一种免DNA提取的快速MTHFR基因第667位点基因型检测引物，其特征在于：包括正向引物和反向引物，所述正向引物由如SEQ ID NO.3所示片段和如SEQ ID NO.4所示片段组成，所述反向引物为如SEQ ID NO.9所示片段，或所述正向引物由如SEQ ID NO.10所示片段和如SEQ ID NO.11所示片段组成，所述反向引物为如SEQ ID NO.12所示片段。

2.一种用于检测MTHFR基因第667位点基因型的试剂盒，包括权利要求1所述引物。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：还包括DNA聚合酶。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述DNA聚合酶选自KOD FX DNA聚合酶。

5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：还包括酶缓冲液、dNTPs。

6.根据权利要求1所述引物、权利要求2-5任意一项所述试剂盒在免DNA提取的非诊断目的MTHFR基因第667位点基因型检测中的应用。

7.一种免DNA提取的非诊断目的MTHFR基因第667位点基因分型检测新方法，包括如下步骤：

1)设计如权利要求1所述的免DNA提取的快速MTHFR基因第667位点基因型检测引物；

2)将靶物质加入含有前述步骤获得的检测引物、DNA聚合酶、酶缓冲液、dNTPs、水的混合液中进行PCR反应；

3)测定步骤2)所得反应液的比色信号。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述靶物质选自基因组DNA、全血、白细胞、口腔上皮细胞中的至少一种。

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述靶物质来源于口腔拭子。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，PCR循环条件包括预变性，然后变性、退火、延伸循环，再次延伸。

11.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，预变性条件为95℃，5min。

12.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，包括如SEQ ID NO.3，SEQID NO.4，SEQ ID NO.9所示片段的引物预变性后，按变性98℃、2min；退火68℃、30s，延伸68℃、30s，35个循环进行。

13.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，包括如SEQ ID NO.10-12所示片段的引物预变性后，按变性98℃、2min；退火63℃-67℃、30s，延伸68℃、30s，35-45个循环进行。

14.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，包括如SEQ ID NO.10-12所示片段引物的PCR扩增反应后，向反应液中加入hemin溶液，在室温下反应5-30分钟，形成G4/hemin DNA酶结构，加入新鲜配置的ABTS^2-和H₂O₂作为底物催化显色，用紫外分光光度计测定比色信号。

15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于：加入hemin溶液后，其终浓度为1μM。