[发明专利]一种快速检测SNP位点的荧光定量试剂盒

权利要求书

1.一种快速检测SNP位点的荧光定量试剂盒，其特征在于：包括SNP位点识别的第一类引物、协助第一类引物进行SNP特征序列恒温扩增的第二类引物和第三类引物、核苷酸单体混合物、核糖核酸内切酶RNase H2、核酸聚合酶Bst DNA和核酸双链荧光染料SYBR Green I的反应混合液，以及使用说明书。

2.根据权利要求1所述的一种快速检测SNP位点的荧光定量试剂盒，其特征在于：所述反应混合物进一步包含pH值调节剂，使得所述反应混合物的pH值维持在7.5-9.5之间。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的一种快速检测SNP位点的荧光定量试剂盒，其中所述反应混合物进一步包含多种选择下组的成分：包含Mg²⁺、K⁺、(NH₄)⁺、H⁺、Cl^-、SO^2-、Tris-Cl和细胞表面活性剂。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的一种快速检测SNP位点的荧光定量试剂盒，所述的第一类引物、第二类引物和第三类引物分别与所述基因组DNA中目标碱基位点前后的一段或两段序列一致或互补，条件是所述的第一类引物3’端序列与基因组DNA在目标碱基位点互补，并且所述的第一类引物中与目标碱基互补的碱基为核糖核苷酸，同时所述的第一类引物在3’端修饰有核酸聚合酶延伸反应阻断基团，所述的第二类引物和第三类引物仅由脱氧核糖核酸组成并且3’端可被核酸聚合酶延伸。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的一种快速检测SNP位点的荧光定量试剂盒，所述反应混合液中核糖核酸内切酶RNase H2、核酸聚合酶Bst DNA与所述第一类引物、第二类引物和第三类引物可分别至于不同的独立容器中。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的一种快速检测SNP位点的荧光定量试剂盒，其特征在于：反应体系采用激活式引物恒温链置换核酸扩增方式，反应温度为55℃～95℃的任一温度，最终得到产物混合液，条件是：

(1)将所述反应混合物置于能够打开所述基因组DNA的双链的温度；

(2)将所述反应混合物置于能够使所述第一类引物、所述第二类引物、所述第三类引物与DNA单链模板结合的温度；

(3)将所述反应混合物置于能够使所述第一类引物与DNA单链模板结合，并且在所述核糖核酸内切酶的作用下去除3’端阻断基团的温度，以产生可被核酸聚合酶延伸的激活的引物产物；

(4)将所述反应混合物置于能够使与DNA单链模板结合的第一类引物在所述核酸聚合酶的作用下延伸长度的温度，以产生扩增产物；

(5)将所述反应混合物置于能够使所述扩增产物脱落成单链的温度。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的一种快速检测SNP位点的荧光定量试剂盒，其特征在于：荧光仪选择SYBR Green I检测通道，实时读取反应混合液荧光信号。