[发明专利]一种从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法

权利要求书

1.一种从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、海参体腔液预处理：收集海参体腔液，离心取上清液，得体腔清液；

S2、透析法低温除盐：4℃条件下对步骤S1所得体腔清液进行透析除盐；

S3、提取主要卵黄蛋白：将分子量6000的聚乙二醇加入步骤S2所得透析除盐后的海参体腔清液，使聚乙二醇终浓度按重量计算为10％～16％，调整pH至7～8，4℃静置3～9h，7500～8500g离心10～20min，收集沉淀；

S4、复溶：将步骤S3所得的主要卵黄蛋白沉淀用磷酸盐缓冲溶液复溶、过滤，得蛋白溶液；

S5、透析：将步骤S4所得蛋白溶液使用去离子水进行透析；

S6、干燥、将步骤S5中所得产物真空冷冻干燥，得主要卵黄蛋白。

2.根据权利要求1所述从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法，其特征在于，步骤S1所述海参预处理具体为：利用滤纸吸干海参表面的液体，将海参从腹部切开，收集体腔液，所述体腔液在4℃、1500～2000×g条件下离心10～15min，收集上清液，得体腔清液。

3.根据权利要求1所述从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法，其特征在于，步骤S2所述透析法低温除盐具体为：利用2～5KDa的透析膜、10～30mM pH7～8的磷酸盐缓冲溶液对步骤S1所得体腔清液进行透析处理48～72h，所述磷酸盐缓冲溶液的用量为体腔清液的10～20倍，控制磷酸盐缓冲溶液温度在4℃。

4.根据权利要求1所述从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法，其特征在于，步骤S4所述复溶具体为：将步骤S3所得的主要卵黄蛋白沉淀用10～30mM pH7～8的磷酸盐缓冲溶液，以5～10mL/g的比例进行复溶，经过0.22～0.45μm微孔滤膜过滤，得蛋白溶液。

5.根据权利要求1所述从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法，其特征在于，步骤S5所述透析具体为：将步骤S4所得的蛋白溶液利用3～4KDa的透析膜、去离子水在4℃透析48h，所述去离子水的用量为蛋白溶液的10～20倍。

6.根据权利要求1所述从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法，其特征在于，步骤S6所述真空冷冻干燥具体为：1～5Pa，-25～-50℃，干燥48～72h。

7.根据权利要求1所述从海参体腔液中制备主要卵黄蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、海参体腔液预处理：利用滤纸吸干新鲜仿刺参表面的液体，将海参从腹部切开，收集体腔液，在4℃、1500×g条件下离心15min，收集上清液即体腔清液；

S2、透析法低温除盐：利用5KDa的透析膜、30mM pH7.4的磷酸盐缓冲溶液对步骤S1所得体腔清液进行透析除盐60h，所述磷酸盐缓冲液的用量为体腔清液的20倍，控制整个除盐过程磷酸盐缓冲溶液温度在4℃；

S3、提取主要卵黄蛋白：在4℃条件下，将分子量6000的聚乙二醇添加到步骤S2所得的海参体腔清液中，使聚乙二醇终浓度按重量计算为16％，使用0.5mol/L的NaOH溶液或0.5mol/L的盐酸溶液调整反应体系pH为8，静置6h，7500g离心20min，收集沉淀；

S4、复溶：将步骤S3所得沉淀按5mL/g的比例用30mM pH7.4的磷酸盐缓冲溶液复溶，经过0.45μm微孔滤膜过滤，得蛋白溶液；

S5、透析：将步骤S4所得的主要卵黄蛋白溶液利用3.5KDa的透析膜、去离子水在4℃透析72h，所述去离子水的用量为蛋白溶液的20倍；

S6、干燥、将步骤S5中所得产物在1Pa，-30℃条件下真空冷冻干燥48h，得主要卵黄蛋白。