[发明专利]基于荧光定量PCR检测鲟鱼的引物和探针及其试剂盒与方法

说明书

本发明公开了一种基于定量PCR技术快速鉴别鲟鱼的检测引物和探针，以及采用了该引物和探针的检测试剂盒和检测方法。检测引物组包括上游引物FP、下游引物BP和探针；检测试剂盒包括引物液、PCR MIX反应液、去离子水、阴性对照和阳性对照。其检测方法是通过提取待检样品DNA，利用荧光定量PCR技术对待检样品DNA进行快速检测，通过实时扩增曲线判断待检样品是否为鲟鱼。本发明具有快速、灵敏、特异、易操作等优点，适于推广应用等优点。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及一种基于荧光定量PCR检测鲟鱼的引物和探针及其试剂盒与方法。

背景技术

鲟鱼(Acipenser)，属于硬骨鱼纲，辐鳍亚纲，鲟形目，是远古鱼类，具有很高的科研、药用和观赏价值。鲟鱼为高蛋白、多脂肪性鱼类，其鱼皮可制成优质特种皮革，鱼卵可制成鱼子酱，鱼胆可入药，鱼肉、鱼肠和鱼骨等均是上等佳肴，可谓是“全身都是宝”。但是由于人为因素影响鲟鱼生存环境和过度捕捞等多因素影响，野生鲟鱼数量锐减，虽然人工养殖技术不断提升，但是仍无法实现大规模养殖。不少商家为了谋求高额利润，在加工处理、市场流通等环节，存在以次充好、乱贴标签的现象。目前关于鉴定鲟鱼的报道较少，主要依赖于传统的形态学鉴别法，但需要从业人员具备较强的专业背景知识，受主观判断影响大，易出错。而以分子生物学为基础的检测方法主要包括微卫星分子标记、随机引物扩增多态性、限制性长度多态性等，但这些方法存在耗时长、操作复杂、重复性差和误差大等弊端。为了对鱼肉及其制品进行溯源，亟需快速、精准、高效的鉴定方法。

发明内容

有鉴于此，本发明所解决的技术问题在于提供一种基于荧光定量PCR检测鲟鱼的引物和探针。

本发明所解决的技术问题还在于提供一种基于荧光定量PCR检测鲟鱼的试剂盒。

本发明所解决的技术问题还在于提供一种基于荧光定量PCR检测鲟鱼的方法。

为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

一方面，本发明提供了一种基于荧光定量PCR检测鲟鱼的引物和探针，包括上游引物FP、下游引物BP、探针Probe，其核苷酸序列分别如下所示：

FP：5-CTGCATACATTAAATTGTAC-3；

BP：5-GGTAGATGAAACATTCTG-3；

Probe：5-FAM-TAATCCCCATTAATTTCTAGCCACCA-TAMRA-3，其中5端标记的荧光基团是FAM，3端标记的淬灭基团是TAMRA。

优选地，扩增反应时，FP引物、BP引物和探针的摩尔比为：2：2：1。

另一方面，本发明还公开了一种基于荧光定量PCR检测鲟鱼的试剂盒，该试剂盒包含权利要求1或2中所述的检测引物和探针。

优选地，该基于荧光定量PCR检测鲟鱼的试剂盒还包括以下成分的部分或者全部：(1)PCR MIX反应液；(2)去离子水；(3)阳性对照和阴性对照。

优选地，所述的PCR MIX反应液含有：5U Taq酶，2.5mM dNTPs，25mM MgCl2，2×PCRbuffer。

优选地，阳性对照为含有鲟鱼特异性基因片段的T载体克隆，阴性对照为不含有鲟鱼特异性基因片段的水或其他溶剂。

再有，本发明还公开了一种基于荧光定量PCR检测鲟鱼的方法，包括如下步骤：

(1)待检样品DNA的提取；

(2)荧光定量PCR反应体系的配制：将步骤(1)中提取的待检样品DNA加入荧光定量PCR反应体系，混匀后离心，所述荧光定量PCR反应体系中含有如权利要求1或2中所述的引物和探针；