[发明专利]一种快速检测三种小麦根茎部病害的方法在审
| 申请号： | 201810950905.3 | 申请日： | 2018-08-21 |
| 公开（公告）号： | CN108893557A | 公开（公告）日： | 2018-11-27 |
| 发明（设计）人： | 于金凤;孙晓凤;李鹏昌;张德珍;徐娜娜;刘爱新 | 申请（专利权）人： | 山东农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 北京中济纬天专利代理有限公司 11429 | 代理人： | 张红军 |
| 地址： | 271018 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 根茎 病害 快速检测 小麦 样本 小麦根腐病菌 小麦纹枯病菌 植物保护领域 多重PCR检测 技术支持 小麦苗期 有效防治 早期诊断 小麦茎 病菌 应用 田间 敏感 检测 | ||
1.一种快速检测三种小麦根茎部病害的方法，其特征在于，包括以下步骤：
ST1 取样，田间取苗期植株；
ST2 提取基因组DNA，采用改良的CTAB法提取基因组DNA；
ST3 进行多重 PCR 反应，添加根据禾谷丝核菌rDNA-ITS、麦根腐平脐蠕孢菌rDNA-ITS、镰孢菌（
ST4 进行DNA电泳并分析。
2. 根据权利要求1所述的一种快速检测三种小麦根茎部病害的方法，其特征在于，步骤ST3所述设计的引物为SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.6 。
3.根据权利要求2所述的一种快速检测三种小麦根茎部病害的方法，其特征在于，步骤ST3所述退火30s，温度为55℃。
4.根据权利要求2所述的一种快速检测三种小麦根茎部病害的方法，其特征在于，步骤ST3中WKF-S18/WKR-S8浓度为0.24-0.48µmol/L。
5.根据权利要求2所述的一种快速检测三种小麦根茎部病害的方法，其特征在于，步骤ST3中RBF-S2/RBR-S1浓度为0.16-0.48µmol/L。
6.根据权利要求2所述的一种快速检测三种小麦根茎部病害的方法，其特征在于，步骤ST3中EF-SF9/EF-SR8浓度为0.24-0.40µmol/L。
7.根据权利要求2所述的一种快速检测三种小麦根茎部病害的方法，其特征在于，步骤ST3中Taq DNA聚合酶为1.5-2.5U。
8.根据权利要求2所述的一种快速检测三种小麦根茎部病害的方法，其特征在于，步骤ST3中dNTP浓度为0.15-0.25mmol/L。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的一种快速检测三种小麦根茎部病害的方法，其特征在于，步骤ST3中WKF-S18/WKR-S8为0.36μmol/L，RBF-S2/RBR-S1为0.48μmol/L，EF-SF9/EF-SR8为0.24μmol/L，Taq DNA聚合酶为2.5 U, d NTP为0.15mmol/L。
10.根据权利要求9所述的一种快速检测三种小麦根茎部病害的方法，其特征在于，同时扩增小麦纹枯病菌、小麦根腐病菌和小麦茎基腐病菌的基因组DNA，获得174、418和 600bp 的特异条带，三种病菌的检测灵敏度都是100 pg。
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