[发明专利]Bsu DNA聚合酶的表达基因、重组表达载体及制备方法

权利要求书

1.一种Bsu DNA聚合酶的表达基因，其特征在于，包括如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。

2.一种重组表达载体，其特征在于，包括pET-28a载体和插入在所述pET-28a载体中的目的基因表达片段，所述目的基因表达片段中含如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的重组表达载体，其特征在于，所述目的基因表达片段的5'端具有BamHI酶切位点黏性末端，所述目的基因表达片段的3'端具有SalI酶切位点黏性末端。

4.一种Bsu DNA聚合酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

将目的基因表达片段导入pET-28a载体中，得到重组表达载体，所述目的基因表达片段含有如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列，所述目的基因表达片段的5'端具有BamHI酶切位点黏性末端，所述目的基因表达片段的3'端具有SalI酶切位点黏性末端；

将所述重组表达载体转入大肠杆菌，得到重组工程菌；以及

对所述重组工程菌进行诱导培养，得到所述Bsu DNA聚合酶。

5.如权利要求4所述的Bsu DNA聚合酶的制备方法，其特征在于，所述目的基因表达片段的制备包括以下步骤：

以如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列为扩增模板，并加入上游引物和下游引物后进行PCR扩增，得到PCR扩增产物，所述上游引物包括BamHI酶切位点，所述下游引物包括SalI酶切位点；

将所述PCR扩增产物插入到pMD19-T Simple载体，并转化至感受态细胞中，得到克隆载体；以及

用限制性内切酶BamHI和限制性内切酶SalI对所述克隆载体进行双酶切，得到目的基因表达片段。

6.如权利要求5所述的Bsu DNA聚合酶的制备方法，其特征在于，所述上游引物的碱基序列如SEQ ID No.2所示，所述下游引物的碱基序列如SEQ ID No.3所示。

7.如权利要求4所述的Bsu DNA聚合酶的制备方法，其特征在于，所述大肠杆菌为BL21(DE3)。

8.如权利要求4所述的Bsu DNA聚合酶的制备方法，其特征在于，所述对所述重组工程菌进行诱导培养得到所述Bsu DNA聚合酶的步骤中，包括：

在重组工程菌的菌落OD值为0.4～0.8时，加入终浓度为0.05mM～0.15mM的异丙基硫代半乳糖苷，并在19℃～25℃诱导表达20h～24h，固液分离收集上清，得到粗产物；以及

将所述粗产物纯化，得到所述Bsu DNA聚合酶。

9.如权利要求8所述的Bsu DNA聚合酶的制备方法，其特征在于，所述将所述粗产物纯化得到所述Bsu DNA聚合酶的步骤中，包括：

将所述粗产物采用硫酸铵盐析后进行Ni亲和纯化，得到所述Bsu DNA聚合酶。

10.一种Bsu DNA聚合酶，其特征在于，通过如权利要求4～9任一项所述的Bsu DNA聚合酶的制备方法获得。