[发明专利]人EGFR基因T790M位点检测的引物、探针、PCR反应液和试剂盒在审
| 申请号： | 201810522074.X | 申请日： | 2018-05-25 |
| 公开（公告）号： | CN108728536A | 公开（公告）日： | 2018-11-02 |
| 发明（设计）人： | 赖炳权;许少飞;李伟琴;罗景燕;苏普霞;李祎予 | 申请（专利权）人： | 广州永诺生物科技有限公司;广东顺德永诺生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 郝传鑫;周全英 |
| 地址： | 510000 广东省广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 探针 突变型探针 野生型探针 核苷酸序列 引物 位点检测 灵敏度 试剂盒 分子生物学领域 荧光报告基团 淬灭基团 修饰基团 引物扩增 非荧光 锁核酸 碱基 位点 亲和力 修饰 | ||
1.人EGFR基因T790M位点检测的引物，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如SEQ IDNO:1和SEQ ID NO:2所示。
2.人EGFR基因T790M位点检测的探针，其特征在于，包括针对人EGFR基因T790M位点的突变型探针和野生型探针，所述突变型探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述野生型探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；所述突变型探针和野生型探针的5’端标记有不同的荧光报告基团，3’端均标记有非荧光淬灭基团并连接有MGB修饰基团；所述突变型探针和野生型探针的至少一个碱基还进行锁核酸修饰。
3.如权利要求2所述的人EGFR基因T790M位点检测的探针，其特征在于，所述荧光报告基团为FAM、TET、VIC或HEX；所述非荧光淬灭基团为NFQ。
4.如权利要求2或3所述的人EGFR基因T790M位点检测的探针，其特征在于，所述突变型探针的第7和第11个碱基进行锁核酸修饰，所述野生型探针的第7个碱基进行锁核酸修饰。
5.如权利要求1所述引物和/或如权利要求2～4任一项所述探针在制备用于检测人EGFR基因T790M位点的试剂盒或PCR反应液中的应用。
6.人EGFR基因T790M位点检测的PCR反应液，其特征在于，包括如权利要求2～4任一项所述探针以及如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物。
7.如权利要求6所述的人EGFR基因T790M位点检测的PCR反应液，其特征在于，还包括用于微滴数字PCR的PCR预混液。
8.如权利要求7所述的人EGFR基因T790M位点检测的PCR反应液，其特征在于，所述PCR反应液中，如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物的浓度均为20μm/L，所述突变型探针和野生型探针的浓度均为10μm/L。
9.人EGFR基因T790M位点检测的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求6～8任一项所述PCR反应液。
10.如权利要求9所述的人EGFR基因T790M位点检测的试剂盒，其特征在于，还包括DNA提取试剂。
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