[发明专利]一种快速富集水产蛋白水解液中抗菌肽的方法

说明书

一种快速富集水产蛋白水解液中抗菌肽的方法，所述的水产蛋白水解液通过负电荷型磁性介孔微球定向富集并浓缩制备水产蛋白水解液中、主要包含精氨酸、组氨酸和赖氨酸残基的抗菌肽；它基于大多数水产蛋白抗菌肽带有正电荷，且电荷数越高其抗菌作用越强的特性，以磁性Fe3O4为基质制备磁性氧化硅介孔微球，提高微球表面吸附面积，然后通过化学反应将负电荷键合在磁性介质微球表面，制备出的负电荷型磁性介质微球，该微球可以特异性吸附水产蛋白水解液中带有精氨酸、组氨酸和赖氨酸残基的抗菌肽类；具有制备方法简单，成本低，且能够大规模生产，提高制备效率等特点。

技术领域

本发明涉及的是一种快速富集水产蛋白水解液中抗菌肽的方法。

背景技术

水产蛋白通过外源蛋白酶水解方式可以得到具有抗菌活性的蛋白水解液，但是水产蛋白水解液中肽种类繁多，传统的分离纯化方式获取目标抗菌肽工序繁琐，成本高，不适用于工业化规模生产抗菌肽。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种抗菌肽的制备方法简单，成本低，且能够大规模生产，提高制备效率的快速富集水产蛋白水解液中抗菌肽的方法。

本发明的目的是通过如下技术方案来完成的，一种快速富集水产蛋白水解液中抗菌肽的方法，所述的水产蛋白水解液通过负电荷型磁性介孔微球定向富集并浓缩制备水产蛋白水解液中、主要包含精氨酸、组氨酸和赖氨酸残基的抗菌肽。

作为优选：所述的水产蛋白水解液是通过如下步骤制取：

a）原料处理：将水产鱼类去头、去尾、去骨后留取鱼肉以作备用；

b）前处理：用清水将步骤a）所得的鱼肉洗净，沥干水分，切碎后室温条件下匀浆，冷冻贮藏；

c）复合酶水解：将步骤b）所得鱼肉浆按2-5倍重量比加入去离子水，调节pH为6-7，加入复合酶，温度40-50℃水解，复合酶的重量百分比为鱼肉浆的0.2%-0.8%，水解1.5-6小时，水解结束后于沸水中保持8-15min灭酶，冷却后抽滤，再离心过滤，得到水产蛋白水解液，并于4℃条件下储存，备用；

所述负电荷型磁性介孔微球的制备是：首先采用溶剂热方法制备Fe₃O₄磁性微球，然后通过溶胶凝胶法在Fe₃O₄磁性微球表面包覆介孔二氧化硅，得到磁性介孔硅球，最后用化学反应将负电荷键合在磁性介孔硅球表面。

作为优选：所述复合酶由风味酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶两种以上组成，风味酶的酶活力为40万U/克，木瓜蛋白酶的酶活力为200万U/克，中性蛋白酶的酶活力为10万U/克；所述复合酶中风味酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶重量比为1 ：3 ：2；

所述负电荷型磁性介孔微球的制备方法具体包括如下步骤：

1)Fe3O4 微球的合成和制备采用溶剂热法合成Fe₃O₄微球：将1-3mmol的FeCl₃·6H₂O溶于20-50ml乙二醇中，得到黄色透明溶液；将1-5mmol无水醋酸钠加入到上述溶液中，磁力搅拌30min后，将溶液转入50-100ml不锈钢反应釜中，放入烘箱中在180-220℃下晶化8-72h；产物用30ml乙醇洗6次，真空干燥，得到Fe₃O₄微球；