[发明专利]一种快速富集水产蛋白水解液中抗菌肽的方法

权利要求书

1.一种快速富集水产蛋白水解液中抗菌肽的方法，其特征在于：所述的水产蛋白水解液通过负电荷型磁性介孔微球定向富集并浓缩制备水产蛋白水解液中、主要包含精氨酸、组氨酸和赖氨酸残基的抗菌肽。

2.根据权利要求1所述的快速富集水产蛋白水解液中抗菌肽的方法，其特征在于：

所述的水产蛋白水解液是通过如下步骤制取：

a）原料处理：将水产鱼类去头、去尾、去骨后留取鱼肉以作备用；

b）前处理：用清水将步骤a）所得的鱼肉洗净，沥干水分，切碎后室温条件下匀浆，冷冻贮藏；

c）复合酶水解：将步骤b）所得鱼肉浆按2-5倍重量比加入去离子水，调节pH为6-7，加入复合酶，温度40-50℃水解，复合酶的重量百分比为鱼肉浆的0.2%-0.8%，水解1.5-6小时，水解结束后于沸水中保持8-15min灭酶，冷却后抽滤，再离心过滤，得到水产蛋白水解液，并于4℃条件下储存，备用；

所述负电荷型磁性介孔微球的制备是：首先采用溶剂热方法制备Fe₃O₄磁性微球，然后通过溶胶凝胶法在Fe₃O₄磁性微球表面包覆介孔二氧化硅，得到磁性介孔硅球，最后用化学反应将负电荷键合在磁性介孔硅球表面。

3.根据权利要求2所述的快速富集水产蛋白水解液中抗菌肽的方法，其特征在于：

所述复合酶由风味酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶两种以上组成，风味酶的酶活力为40万U/克，木瓜蛋白酶的酶活力为200万U/克，中性蛋白酶的酶活力为10万U/克；所述复合酶中风味酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶重量比为1 ：3 ：2；

所述负电荷型磁性介孔微球的制备方法具体包括如下步骤：

1)Fe3O4 微球的合成和制备采用溶剂热法合成Fe₃O₄微球：将1-3mmol的FeCl₃·6H₂O溶于20-50ml乙二醇中，得到黄色透明溶液；将1-5mmol无水醋酸钠加入到上述溶液中，磁力搅拌30min后，将溶液转入50-100ml不锈钢反应釜中，放入烘箱中在180-220℃下晶化8-72h；产物用30ml乙醇洗6次，真空干燥，得到Fe₃O₄微球；

2) 磁性介孔硅球的制备是：将0.1-0.3g干燥后的Fe₃O₄微球超声分散到50ml，浓度为1-2mol/l的盐酸溶液中，超声分散10min后磁性分离，反复操作三次后超声分散到20-60ml去离子水中，得到水相磁流体溶液；然后将2-5ml磁流体超声分散到80ml无水乙醇和20ml去离子水中，加入1-3ml氨水，超声分散10min，使之完全分散，在电动搅拌下，加入0.5-2mlTEOS，室温下反应6-12h，磁性分离产物，用去离子水和无水乙醇洗涤3-5次；再次将上述产物超声分散在60-80ml的去离子水与0.3-0.5gCTAB 的混合溶液中，加入1-2ml氨水和60-80ml的乙醇，室温下反应0.5h后，加入0.5-3ml的TEOS，反应6-12h后磁性分离产物，并用水和无水乙醇洗涤5次后，将洗涤后的磁性介孔硅球用60ml的丙酮在80℃下反复萃取24-48h，除去CTAB后60℃下真空干燥12h，得到磁性介孔硅球。