[发明专利]一种猪血蛋白酶解脱色的方法及其在制备缓解疲劳药物和抗肿瘤药物中的应用

说明书

本发明涉及医药技术领域，具体涉及猪血蛋白酶解脱色方法及其在制备缓解疲劳药物和抗肿瘤药物中的应用。采用木瓜蛋白酶酶解的方法对猪血血红蛋白进行脱色，并结合低浓度低用量双氧水进行二次脱色，得到猪血蛋白酶解脱色粉。本发明猪血蛋白酶解脱色方法操作简单，生产成本低，制得猪血蛋白粉分子量小，无苦味，利于吸收，制备的猪血蛋白酶解脱色粉具有明显缓解小鼠运动疲劳的作用，对肝癌H₂₂实体瘤小鼠肿瘤抑制率分别为33.62%、45.14%，与阴性对照组相比均有显著性差异，脾、胸腺指数与阴性对照组相比无显著性差异。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及猪血蛋白酶解脱色方法及其在制备缓解疲劳药物和抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

猪血是一种价格低廉又可大量获取的高营养价值的食品工业副产品，是极具开发应用的动物性蛋白资源。猪血中含有大量的蛋白质、丰富的氨基酸以及适量的矿物质、维生素、激素、酶类和其他生物活性物质。在医药方面，已有研究应用现代提取分离技术从猪血中提取多种生化药物和生化试剂，成功用于临床。另有研究表明，食用猪血可以治疗头痛、恶心、眩晕、不饥食少、呕吐等症。目前猪血红蛋白主要加工成血粉作为动物性蛋白饲料，但血粉适口性差，难以消化吸收造成了资源的浪费。猪血红蛋白作为可食用的优质蛋白，由于难以脱色腥味重，易氧化变色，限制了它在食品领域的应用。因此，猪血红蛋白的脱色是其应用的技术关键，目前国内对于猪血红蛋白脱色的研究比较多，主要的方法可以分为物理脱色、氧化脱色、吸附脱色、有机溶剂萃取、水解脱色等。

水解脱色是目前运用的最多的方法，水解后不仅将血红素和珠蛋白分离开了，而且蛋白质自身被降解成肽、胨等，消化率得到了很大的提高，水解法分为酸法水解和酶法水解。酶法水解得比较充分，比较常用的酶有中性蛋白酶、胰酶、木瓜蛋白酶、微生物蛋白酶。但是单独的运用酶水解得到的产物可能并未完全脱色，有些还会有苦味，异味等。

而本研究用木瓜蛋白酶的酶解方法对血红蛋白进行脱色，并结合低浓度低用量双氧水的二次脱色方法，不仅能够脱色完全，不破坏蛋白质的营养价值，而且得出的产品无苦味、异味，并且操作简单，生产成低，这就给工业化生产提供了可行性。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种猪血蛋白酶解脱色方法及其在制备缓解疲劳药物和抗肿瘤药物中的应用，具体通过以下技术方案来实现：

一种猪血蛋白酶解脱色方法，依次包括以下步骤：

(1)称取猪血液，加水制成溶液，离心得猪血球液，然后加入3-7倍于猪血球液体积的水(优选为6-7倍)，搅拌使血球破裂；

(2)向步骤(1)所得混合液中加入猪血球液重量(0.02-0.08)％的木瓜蛋白酶，在40-55℃下酶解1-8h，酶解过程中滴加盐酸使反应液的pH为3.0-7.0；

(3)酶解结束后，终止酶解反应，冷却后将酶解液离心，弃渣，得上清液；

(4)向上清液中加入H₂O₂，使H₂O₂水溶液的浓度为(0.1-0.3)％，在45-65℃下进行脱色30-120min，脱色至酶解液变为淡黄色，然后用NaOH将其pH值调至中性，经超滤膜超滤、浓缩之后，喷雾干燥得猪血蛋白酶解脱色粉。

进一步的，步骤(1)中所述搅拌为转速200rpm搅拌30min，步骤(3)中所述离心为：将酶解液以8000r/min离心4min。

进一步的，步骤(3)中终止酶解反应的操作为将酶解液置于沸水浴中10min以钝化木瓜蛋白酶终止反应。

进一步的，所述步骤(2)中酶解过程中滴加盐酸使反应液的pH为5.0。

进一步的，所述步骤(2)中向步骤(1)所得混合液中加入猪血球液重量0.05％的木瓜蛋白酶，在45℃下酶解3-5h(优选为4h)。