[发明专利]一种16种食源性致病菌检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种16种食源性致病菌检测试剂盒，包括PCR扩增试剂和对照试剂，所述的PCR扩增试剂由PCR反应缓冲液A、酶系B和16种食源性致病菌的引物探针混合液构成，所述的对照试剂主要由阴性对照和阳性对照组成，所述的PCR反应缓冲液A的成分为5*Buffer，25mM dN(U)TPs，所述的酶系B主要由HotStart Hi Taq DNA聚合酶、UNG防污染酶构成，所述的16种食源性致病菌检测引物探针包含含沙门氏菌、志贺氏菌、肠致病性大肠杆菌、产毒素大肠杆菌、侵袭性大肠杆菌、黏附性大肠杆菌、大肠杆菌O157、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、蜡样芽孢菌、空肠弯曲菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌O1群、霍乱弧菌O139群、小肠结肠炎耶尔森菌和阪崎肠杆菌检测引物探针混合液。本发明具有检测灵敏度高、简便快捷等优点。

技术领域

本发明涉及生物技术和致病菌检测领域，具体来说是一种16种食源性致病菌检测试剂盒。

背景技术

民以食为天，食以安为先。但近年来，食品安全件事频发，对人们的健康构成了较大的威胁。食品微生物污染问题日渐突出，已成为全球范围内重要的公共卫生问题。根据美国农业部经济研究局的统计结果显示,沙门氏菌、致病性大肠杆菌(EPEC、ETEC、EIEC、EAEC、EHEC)、弯曲杆菌、副溶血性弧菌、葡萄球菌及毒素、致病性蜡样芽胞杆菌、变形杆菌属、李斯特菌、志贺氏菌等几类重要的细菌会造成巨大的经济损失。

沙门氏菌(Salmonella)为肠杆菌科中重要的一类革兰氏阴性菌，极易污染食品、水源及畜产品，是畜禽肉胴体、畜禽产品污染的重要来源，并可通过各种途经传染给人，引起人食物中毒、急性肠胃炎和动物腹泻等疾病。我国细菌性食物中毒70％～80％是由沙门氏菌引起。

志贺氏菌(Shigella spp.)通称痢疾杆菌，是一类具有高度传染性的肠道致病菌。主要通过消化道途径传播，侵袭肠上皮细胞，引起以发热、腹痛、腹泻为特征的典型的痢疾症状，严重危害人类健康。根据WHO统计，每年有1.647亿人感染痢疾，约有110万死亡，其中多数为5岁以下的儿童。在成年患者中，10～100CFU志贺氏菌就可通过感染肠道致病，引发严重的炎症反应。在我国感染性腹泻病原菌中高居首位经常有由于水源或食品受到志贺菌污染而引起痢疾、腹泻等疾病流行的报道。

引起腹泻的大肠杆菌称为致泻性大肠杆菌，根据毒力因子、致病机理和流行病学特征，通常将致泻性大肠杆菌分为5类，分别为肠致病性大肠杆菌(EPEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠黏附性大肠杆菌(EAEC)以及肠出血性大肠杆菌(EHEC)。肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)的多数菌株无动力，生化反应和抗原结构均近似痢疾杆菌，应予注意。

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)为革兰氏阳性菌，是引起细菌性食物中毒的重要病原菌之一。其产生的金黄色葡萄球菌肠毒素在食物中毒事件中占50％，居于整个细菌性食物中毒首位。金黄色葡萄球菌肠毒素按照血清型可以分为14型(A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K、L、M、N、O)。爆发性食物中毒最常见的血清型为A型和D型。

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes)单增李斯特菌为革兰阳性短小杆菌，无芽孢，不分支，形状规则。主要以食物为传染媒介，是重要的食源性人兽共患病原菌，WHO将其列为20世纪90年代食品中四大致病菌之一。该菌在自然界中分布广泛，极易污染食品而引起食物中毒和李氏杆菌病的暴发。